论文摘要
[目的]肾上腺素能受体（Adrenergic receptor，AR）是典型的G蛋白偶联受体家族（GPCR）成员。介导交感神经递质去甲肾上腺素（NE）和肾上腺素的中枢和外周作用，它在心血管系统的调节如血压、心率、心肌收缩、物质代谢等方面具有十分重要的地位。β受体和G蛋白偶联调节腺苷酸环化酶的活性。刺激β受体增加胞内cAMP的水平，而阻断β受体则降低胞内cAMP的水平。因此，刺激或阻断β受体可调节PKA和／或MAP激酶（MAPK）的活性，从而调节核内特异cAMP反应因子结合蛋白（CREB）的活性，引起特异的生物学效应。既往实验证明，杏仁复合体β受体参与调控LTP和条件性恐惧记忆，大鼠海马CA1区β受体参与长时程增强和空间学习。目前对β肾上腺素受体功能及机制的研究主要是通过生理学的研究方法，注射药物——观察整体——推测功能。而我们则从基因功能研究角度出发，构建ADRB1上调、下调载体，包装成重组腺相关病毒载体，并最终制备转基因动物，以观察由于β1肾上腺素受体表达量的改变所引起的生物学、行为学效应，以此研究β1肾上腺素受体在学习和记忆中的作用。[方法]1．采用基因过表达方式，构建ADRB1上调载体。2．采用RNA干扰技术，构建ADRB1下调载体。3．根据细胞转染、流式细胞术及实时荧光定量PCR结果筛选出包装病毒的候选载体。4．利用AAV-Helper free system生产重组腺相关病毒。5．采用一步柱纯化法和“氯仿处理-PEG／NaCl沉淀-氯仿抽提”法，对病毒的初级产物进行浓缩和纯化。6．通过表达载体所携带的绿色荧光测定重组腺相关病毒的滴度。[结果]1．构建了hADRB1上调、下调表达载体，并通过了酶切鉴定，细胞转染、流式细胞术及实时荧光定量PCR的验证。2．包装并纯化了含hADRB1上调、下调表达框的重组腺相关病毒。
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标签：重组腺相关病毒论文;