论文摘要
植物内生真菌能产生丰富的次生代谢产物,这些次生代谢产物通常具有抗菌、抗肿瘤等重要生物活性。本论文所研究的植物内生真菌By254由本实验室分离自中国江苏省南通市的棉花根内。通过形态学和分子生物学手段鉴定其属于拟茎点霉（Phomopsis sp.）;对其发酵产物进行分离和纯化,并结合活性检测,最终从该菌发酵产物中分离得到3种细胞松弛素和22种挥发油成分。主要研究内容包括以下几方面：首先,对从棉花根内分离到一株内生真菌By254进行形态学和分子生物学鉴定,通过观察其在PDA和OMA培养基上的菌落形态及其产生的分生孢子特征进行了初步鉴定,结合ITS基因的测序结果鉴定该菌株属于拟茎点霉属（Phomopsis sp.）真菌。其次,用小米麸皮培养基对拟茎点霉By254进行固体发酵,并对其活性代谢产物进行分离和鉴定。利用柱层析,薄层层析和高效液相色谱等方法,并结合活性追踪检测,从其发酵产物中分离到三种次生代谢产物（化合物1,2,3）,通过质谱（ESI-MS）、核磁共振(1H-NMR,13C-NMR,DEPT135,HMQC,HMBC, （1H-1H COSY,NOESY）等方法鉴定三种化合物均为细胞松弛素（cytochalasin）,化合物1,2,3分别为epoxycytochalasin H,cytochalasin N和cytochalasin H。再次,通过纸碟法测定这三种化合物对10种植物病原真菌（终极腐霉、小麦赤霉病菌、油菜菌核病菌、玉米小斑病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫霉、番茄灰霉病菌、小麦根腐病菌、小麦全蚀病菌、小麦纹枯病菌）和10种植物病原细菌（金黄色短小杆菌、萎蔫短小杆菌萎蔫致病变种、燕麦嗜酸菌属西瓜亚种、密执安棒状杆菌环腐亚种、密执安棒状杆菌密执安亚种、密执安棒状杆菌布拉斯亚种、野油菜黄单胞茵野油菜致病变种、野油菜黄单胞杆菌水稻致病变种、带化红球菌、青枯劳尔氏菌）的抑制作用,结果显示,三种化合物对除辣椒疫霉外的其余9种病原真菌都有一定的抑制作用,对病原细菌均无抑制作用。通过生长速率法进一步测定了三种化合物对这9种病原真菌的抑制中浓度（IC50）,结果显示：除了化合物1对终极腐霉和化合物2对小麦赤霉病菌的抑制作用较弱以外,3种化合物对其余病原真菌都有较强的抑制作用,IC50为0.15-57.32μg/mL。这三种化合物对本文中测试植物病原菌的抑菌活性研究为首次报道。最后,本文对拟茎点霉By254产生的挥发油成分进行了研究。通过有机溶剂萃取其固体发酵产物中的挥发油组分,并进行甲酯化处理,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术,首次对其挥发油成分进行了分析。结果表明,从拟茎点霉By254中共分离鉴定出22种成分,占总挥发油量的93.0%。其中脂肪酸占92.6%,主要包括：硬脂酸（18.7%）、14-甲基-十五烷酸（16.3%）、8-11-十八碳二烯酸（15.5%）、棕榈酸（8.1%）和11-十八碳烯酸（7.2%）等,不饱和脂肪酸占41.6%。本研究首次分析拟茎点霉中的挥发油成分。