论文摘要
目的：1、建立人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1三维培养模型,为研究血管生成拟态（VM）形成的分子机制及针对VM的抗肿瘤疗法,提供有利的模型。2、研究不同浓度的姜黄素（Cur）对OCM-1细胞株VM形成的影响,探讨Cur是否可以通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）信号通路抑制VM的形成,以达到抗肿瘤的作用。为Cur抗肿瘤的临床应用及其作用机制的深入研究提供科学依据。方法：1、实验第一部分：体外三维培养OCM-1细胞,并进行过碘酸一雪夫氏反应（PAS）染色,观察PAS阳性的环状结构的形成,即其形成VM的能力。2、实验第二部分：观察不同浓度（0 umol/L、10umol/L、20umol/L、30umol/L40umol/L）的Cur对OCM-1细胞株形成VM能力的影响,通过进行PAS染色,观察姜黄素对PAS阳性的环状结构的形成能力的影响,通过免疫细胞化学染色检测参与VM形成PI3K与上皮受体酪氨酸激酶（EphA2）的表达并初步探讨Cur抑制VM形成的机制。3、所得结果输入SPSS16.0统计软件进行分析。结果：1、OCM-1细胞三维培养模型的建立：OCM-1细胞三维培养后4天,细胞大部分呈多角形,胞浆较丰富,核圆形,可见核仁,少部分肿瘤细胞长梭形,可见三五个长梭形细胞彼此连接围成半环状结构。一周后,肿瘤细胞几乎均变成长梭形,沿着胶原支架生长,细胞伸出长的突起,彼此之间相互接触围成环状结构。经PAS染色可见,瘤细胞大多呈弥散排列,肿瘤细胞模仿机体血管生成而形成瘤细胞条索并围成管道,一层细胞外基质（PAS阳性物质）围成环状结构。2、形态学观察Cur对OCM-1细胞形成VM结构的影响：Cur 0umol/L组：OCM-1细胞有浸润,在鼠尾胶上叠加生长,随着时间的延长,部分细胞逐渐伸展、变形,呈长条状、梭状或弧状；一周后细胞与细胞之间相互连接,并可成为管状、腔样、树枝样、网状等管腔结构,即V M;Cur 10umol/L组：部分OCM-1细胞能够形成条梭状和长条形,形成V M;Cur 20umol/L组：部分OCM-1细胞能形成长条形和梭形,但不能形成VM;Cur 30umol/L组：大部分细胞呈圆形,少细胞能形成长条形和梭形,但不能形成V M；Cur 40umol/L组细胞皱缩成圆形,不能形成VM。3、PAS染色观察Cur对OCM-1细胞VM形成的影响：Cur 0umol/L组：部分肿瘤细胞表达PAS阳性物质,相互连接形成环状、管腔样,网格状结构,即V M:Cur 10umol/L组：部分OCM-1细胞能够形成条梭状和长条形,PAS阳性,形成网格状VM结构:Cur 20umol/L组：少部分OCM-1细胞能形成长条形和梭形,PAS阳性,形成网格状VM结构；Cur 30umol/L:大部分细胞呈圆形,PAS阴性,少部分细胞能形成长条形和梭形,PAS阳性,但不能形成网格状VM结构;Cur 40umol/L组细胞皱缩成圆形,PAS阴性,不能形成网格状VM结构。4、免疫组织化学检测Cur对OCM-1细胞EphA2和P13K蛋白表达的影响：EphA2和P13K蛋白表达,Cur（10、20、30、40umol/L）组,呈浓度依赖性降低,抑制VM的最佳浓度为30umol/L。各组分别与Cur 0umol/L组比较,差异有统计学意义（P=0.000）,其中30umol/L和40umol/L比较,差异无统计学意义（P=0.300;P=0.188）。结论：1、我们建立的脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1三维培养模型是以鼠尾胶原蛋白Ⅰ型为支架,从形态学和PAS染色两个方面观察到环状结构即VM的存在,为研究VM形成的分子机制及抗VM的抗肿瘤疗法,提供了有利的体外研究模型,也为本课题的进一步研究打下了基础。2、Cur对OCM-1细胞株形成VM管道结构的能力具有抑制作用,且呈浓度依赖性,Cur浓度达到30umol/L时,其对OCM-1细胞株VM的形成具有明显的抑制作用。3、Cur抗瘤作用明确,结合文献及本实验研究,其机制可能是通过抑制PI3K信号通路从而抑制VM的形成。为Cur抗肿瘤的临床应用及其作用机制的深入研究提供实验依据。
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相关论文文献
- [1].姜黄素对人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1血管生成拟态形态学和病理改变的影响[J]. 眼科新进展 2017(01)
- [2].人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1的三维培养及血管生成拟态机制的研究[J]. 眼科新进展 2017(09)
- [3].siRNA特异性沉默HIF-1α对缺氧培养的OCM-1细胞中Vimentin表达的影响[J]. 国际眼科杂志 2014(03)
- [4].雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究[J]. 解放军医学杂志 2015(02)
- [5].放射线诱导的HtrA2基因表达对人葡萄膜黑色素OCM-1细胞的影响[J]. 中国癌症杂志 2014(02)
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