微卫星标记技术定性、定量鉴定动物源性成分的应用研究

论文摘要

商品中动物源成分的掺假、冒充、瞒报等关系食品安全的事件屡禁不止,损害着消费者的权益,影响着市场秩序。疯牛病的爆发,让人们开始重新思考饲料中添加动物源成分的可行性。因此,商品之中动物源成分的鉴定显得越来越重要。随着分子生物学技术的发展,微卫星DNA已被深入了解,微卫星DNA遵循孟德尔遗传定律,可以稳定遗传,被广泛应用于群体遗传研究,但是关于应用微卫星标记技术鉴别肉品的研究还鲜有报道。运用微卫星标记技术建立一种快速、有效的动物源成分的检测方法,确定动物成分的物种,能帮助质检人员提高工作效率降低成本,快速控制动物源性商品的随意流通,扩大食品安全控制范围,满足市场发展的检测需要。本试验应用微卫星标记技术鉴别商品中常见的动物源性成分。采集市场上常见的猪、牛、绵羊、山羊、鸭、鹅、鸡、狗为试验对象,从Gnenbank中初选出鸭、猪、牛、绵羊四种动物的微卫星标记,通过对微卫星标记的序列设计引物,然后进行PCR-凝胶电泳,筛选出每种动物具有种内通用、种间特异的微卫星标记用以鉴定。试验结果表明：在猪、牛、绵羊、山羊、鸭、鹅、鸡、狗的动物源性成分中鉴定鸭源性成分采用鸭的特异性微卫星标记AJ272583,扩增的目的片段为267bp；鉴定牛源性成分采用牛的特异性微卫星标记AB463,扩增的目的片段为178bp；鉴定绵羊源性成分采用牛的绵羊的特异性卫星标记x89268,扩增的目的片段为207bp；鉴定猪源性成分采用猪的特异性微卫星标记EF046,扩增的目的片段为212bp。分别应用鸭的微卫星标记AJ272583、牛的微卫星标记AB463、绵羊卫星标记x89268、猪的微卫星标记EF046进行荧光定量PCR,得到鸭源性成分肉的百分含量公式为C=10[（Ct-17.77）/-3.3844]×100％；牛源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[（Ct-16.895）/-3.3844]×100％；绵羊源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[（Ct-18.639）/-3.3844]×100％；猪源性成分肉的百分的含量的公式为C=10[（Ct-19.389）/-3.1439]×100％.实时荧光PCR法能够对混合肉品中鸭、牛、绵羊、猪源性成分进行快速准确地定性、定量分析,可以作为市场监督和检验鉴定的可行性方法。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 部分縮略语
• 上篇 文献综述
• 第一章 微卫星概述及研究现状
• 1 微卫星标记的概念
• 2 微卫星DNA的结构和作为分子遗传标记的优点
• 2.1 丰富性
• 2.2 多态性
• 2.3 保守性
• 2.4 呈共显性遗传而且遵循孟德尔遗传规律
• 2.5 容易检测,重复性好
• 3 微卫星产生及进化
• 3.1 滑链错配机制
• 3.2 减数分裂中不对等互换
• 4 微卫星标记的筛选
• 4.1 用经典分子生物学方法克隆所需要的微卫星位点
• 4.2 利用已发现的微卫星位点寻找新的位点
• 5 微卫星DNA的检测方法
• 5.1 变性聚丙烯酞胺凝胶电泳法
• 5.2 单链构象多态性（SSCP）
• 5.3 多重PCR微卫星荧光标记法
• 6 微卫星标记技术的应用
• 6.1 亲缘关系的比较和鉴定
• 6.2 疾病的诊断和鉴别
• 6.3 遗传图谱及QTL分析
• 6.4 种群研究及生物保种
• 第二章 肉品鉴定的研究进展
• 1 以显微镜观察为基础的检测方法
• 2 以检测蛋白质为基础的方法
• 3 以检测DNA为基础的方法
• 3.1 DNA杂交
• 3.2 DNA指纹分析
• 3.3 PCR-RFLP分析
• 3.4 PCR特异扩增（species-specific PCR）
• 4 层析色谱法
• 5 光谱学检测方法
• 第三章 实时定量PCR研究进展
• 1 FQ-PCR反应方法的分类
• 1.1 SYBR Green Ⅰ
• TMI荧光染料'>1.2 LC Green^TMI荧光染料
• 1.3 水解探针（TaqMan）
• 1.4 分子信标
• 2 FQ-PCR方法的应用
• 2.1 病原体检测
• 2.2 肿瘤研究
• 2.3 基因表达研究
• 2.4 转基因研究
• 2.5 基因突变及多态性研究
• 参考文献
• 下篇 实验部分
• 第四章 常见畜禽微卫星标记的筛选
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 鸭的特异性微卫星标记
• 2.2 牛的特异性微卫星标记
• 2.3 猪的特异性微卫星标记
• 2.4 绵羊的特异性微卫星标记
• 3 讨论
• 3.1 反应条件的优化
• 3.2 DNA提取
• 3.3 微卫星标记用于检测肉品的优点
• 3.4 微卫星标记的选取及其结果
• 4 小结
• 参考文献
• ABSTRACT
• 第五章 混合肉品的定量鉴定
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 鸭源性成分的荧光定量PCR检测
• 2.2 鸭源性成分的曲线及计算公式
• 2.3 牛源性成分的荧光定量PCR检测
• 2.4 牛源性成分的曲线及计算公式
• 2.5 绵羊源性成分的荧光定量PCR检测
• 2.6 绵羊源性成分的曲线及计算公式
• 2.7 猪源性成分的荧光定量PCR检测
• 2.8 猪源性成分的曲线及计算公式
• 2.9 验证公式的合理性
• 3 讨论
• 4 小结
• ABSTRACT
• 参考文献
• 全文总结
• 论文创新点
• 致谢