论文摘要
目的:探讨全氟化碳原液（PFC）和新型全氟化碳乳剂（NPE）对A549细胞生长的影响;观察PFC和NPE对TNF-α攻击的A549细胞钠离子通道（ENaC）表达的影响。方法:1.PFC对A549细胞生长影响及对TNF-α攻击的A549细胞ENaC表达影响的研究。分为对照组、TNF-α组、PFC组和治疗组共四组。TNF-α以100ng/ml的浓度攻击细胞,PFC以1/10细胞培养液体积的比例与细胞共同培养。正常组细胞不做任何处理,实验组细胞分别用不同因素处理2、4、6h,用MTT法测各组细胞活力变化;提取细胞RNA和蛋白,分别用real-time PCR法检测细胞ENaCα、β、γ亚单位表达水平变化;ENaC-α蛋白表达水平采用Western-blot法检测。2. NPE对A549细胞生长影响及对TNF-α攻击的A549细胞ENaC表达影响的研究。分为对照组、TNF-α组、NPE组和治疗组共四组。TNF-α以100ng/ml的浓度攻击细胞,NPE以1/10细胞培养液体积的比例与细胞共同培养。正常组细胞不做任何处理,实验组细胞分别用不同因素处理2、4、6h,用MTT法测各组细胞活力变化;提取细胞RNA和蛋白,分别用real-time PCR法检测ENaCα、β、γ亚单位表达水平变化;ENaC-α蛋白表达水平采用Western-blot法检测。结果:1. PFC对A549细胞生长影响:2h组:与对照组细胞相比较:TNF-α组、PFC组和治疗组细胞基本形态无明显变化。4h组:TNF-α组细胞细胞生长状态不良,死亡细胞较多。PFC组和治疗组细胞一般情况较TNF-α组好,死亡细胞数较少。6h各组细胞一般情况与4h组无明显差别。2. PFC对TNF-α攻击的A549细胞活力的影响:2h组:TNF-α组、PFC组、治疗组细胞吸光度值与对照组比较,差异均无统计学意义（P﹥0.05）。4h组:PFC组细胞吸光度值为与对照组比较,差异无统计学意义（P﹥0.05）;TNF-α组、治疗组细胞吸光度值较对照组降低,治疗组吸光度值较TNF-α组增高,差异具有统计学意义（P﹤0.05）。6h各组吸光度值比较结果与4h组相似。3. real-time PCR结果显示:2h组:与对照组相比,各组ENaC-α、β、γ亚单位mRNA水平变化不明显;处理4h后,与对照组相比,TNF-α组细胞ENaC各亚单位mRNA水平均有不同程度的降低,PFC组细胞则与对照组无明显差异,治疗组细胞ENaC各亚单位mRNA水平也有不同程度降低,与TNF-α组同时相点相比,差异无统计学意义。6h组情况与4h组相同。4. Western-blot结果显示:2h组:与对照组相比,各组ENaC-α蛋白表达变化不明显;4h组和6h组中,有TNF-α组细胞ENaC-α蛋白表达明显下调,其他各组细胞ENaC-α蛋白表达与对照组并无差别。5.NPE对A549细胞生长影响:2h组:与对照组细胞相比较:TNF-α组、NPE组、治疗组细胞基本形态无明显变化。4h组:TNF-α致伤组细胞细胞生长状态不良,死亡细胞较多。NPE组和治疗组细胞一般情况较TNF-α组好,细胞形态变化不明显,死亡细胞数较少。6h组各组细胞一般情况与4h组无明显区别。6. NPE对TNF-α攻击的A549细胞活力的影响: 2h组:NPE组、TNF-α组、治疗组细胞吸光度值与对照组比较,无明显差异（P﹥0.05）。4h组:NPE组细胞吸光度值与对照组比较,无明显差异（P﹥0.05）;TNF-α组、治疗组细胞吸光度值较对照组明显降低,治疗组吸光度值较T组增高,差异具有统计学意义（P﹤0.05）。6h各组吸光度值比较结果与4h组相似。7. real-time PCR结果显示:2h组:与对照组相比,各组ENaC-α、β、γ亚单位mRNA水平变化不明显;处理4h后,与对照组相比,TNF-α组细胞ENaC各亚单位mRNA水平均有不同程度的降低,NPE组细胞则与对照组无明显差别,治疗组细胞ENaC各亚单位mRNA水平也有不同程度降低,但较TNF-α组同时相点相比有明显升高,差异具有统计学意义。6h组情况与4h组相同。8. Western-blot结果显示:2h组:与对照组相比,各组ENaC-α蛋白表达变化不明显;4h组和6h组中, TNF-α组细胞ENaC-α蛋白表达明显下调,治疗组细胞ENaC-α蛋白表达与TNF-α组相比有明显增高,差异具有统计学意义（P﹤0.05）,NPE组细胞ENaC-α蛋白表达与对照组无明显差异。结论:1. TNF-α可对A549细胞生长及活力产生抑制作用,且可以下调细胞ENaC-α、β、γ亚单位及ENaC-α蛋白表达水平。2.PFC可能通过物理屏障作用对TNF-α攻击的A549细胞产生一定的保护作用,对细胞ENaC-α、β、γ亚单位及ENaC-α蛋白表达的下调无改善作用。3.NPE可改善TNF-α对A549细胞生长的抑制作用,同时可以改善TNF-α对细胞ENaC各基因及ENaC-α蛋白表达的下调。
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