中华锯齿米虾卵黄发生的超微结构及免疫组化研究

论文摘要

目前国内外许多学者对十足目甲壳动物的卵巢发育和卵子发生做了大量的研究,但有关中华锯齿米虾卵黄发生过程的研究还未见相关报道,对中华锯齿米虾生殖发育的调控机理仍然不是十分清楚。本文采用透射电镜和免疫组织化学技术系统研究了中华锯齿米虾卵母细胞及其内部各种细胞器在卵黄发生过程中的形态变化特征,以及在这一过程中滤泡细胞的结构变化情况。这项研究,一方面为甲壳动物卵黄发生研究提供理论基础,对甲壳动物生殖发育调控及育种具有重要的实际意义；另一方面对以卵黄蛋白原作为环境内分泌干扰物质的“生物标志物”等毒理学方面的深入研究具有细胞学理论指导意义；同时,还为甲壳动物的毒理学实验确定了一种良好的实验材料。中华锯齿米虾的卵巢分为前叶、后叶两部分,前叶汇合在一起位于心脏下方、肝胰腺上方；后叶位于肠道上方并与肠道平行。在卵巢的发育过程中,可观察到不同时相的卵母细胞。卵原细胞期：细胞圆形,体积较小,核质比较大,细胞质均匀,细胞之间排列相当紧密,没有发现滤泡细胞。卵黄发生前期：细胞体积有所增大,但胞质仍较均匀。该时期滤泡细胞出现,但数目较少,分布也很不规则,且有逐渐将卵母细胞包围分割的趋势。卵黄发生早期：卵黄蛋白合成全面启动,细胞体积由于卵黄蛋白的不断合成而增大,细胞质中开始出现卵黄球。卵母细胞被滤泡细胞全部包围,多层,但它们之间的关系很松散。卵黄发生中期：细胞体积继续增大,形状越来越不规则,近似于三角形。核质比下降。卵母细胞被单层滤泡细胞层完全分割。滤泡细胞渐渐紧贴卵母细胞。卵黄发生后期：卵黄物质继续填充卵母细胞质,部分卵母细胞的细胞核甚至消失。滤泡细胞开始缩小退化。成熟期：卵母细胞中充满成熟的卵黄蛋白。此时滤泡细胞呈一薄层紧贴于卵母细胞乃至完全退化。在此基础上进行电镜观察发现：中华锯齿米虾卵黄发生过程是双源性的。在卵黄发生过程中,卵母细胞中的线粒体、内质网、溶酶体和核糖体等多种细胞器均参与了其内源性合成。其中线粒体最早参与形成卵黄颗粒。在卵黄发生的中后期,内质网成为内源性卵黄蛋白合成最主要的细胞器,并最终演化成颗粒较大且有膜包被的卵黄球；溶酶体也在此时期发挥其特有的吞噬功能,通过与线粒体、内质网、环状片层结构组成自噬泡,相互融合使卵黄球的体积逐渐增大；另外,有些溶酶体通过融合分解线粒体、内质网等胞质细胞器形成髓样结构,最终形成一种电子密度很大的致密卵黄球。外源性卵黄则主要通过卵质膜形成的微绒毛和微吞饮小泡从卵周隙及滤泡细胞中摄取外源物质而形成。通过免疫组织化学实验,充分表明：中华锯齿米虾内源性卵黄物质发生的主要场所是卵母细胞质。在卵黄发生前,卵母细胞中的卵黄物质较少,到了卵黄发生时期,卵母细胞中的卵黄物质快速积累。此外,实验中发现滤泡细胞中也存在卵黄物质,进一步证明了滤泡细胞是外源性卵黄物质来源的主要场所。同时也进一步证实了中华锯齿米虾卵黄发生是双源性的这一结论。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 十足目甲壳动物雌性生殖系统发育及卵子发生
• 1.1.1 雌性生殖系统解剖学
• 1.1.2 雌性生殖系统及其发育的组织学
• 1.1.3 卵子发生的过程及分期
• 1.1.4 卵子发生中的物质积累
• 1.2 卵黄蛋白的生化性质
• 1.3 卵黄蛋白原
• 1.4 研究目的及意义
• 第2章 中华锯齿米虾卵黄发生的超微结构研究
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 仪器与试剂
• 2.2 实验结果
• 2.2.1 卵子发生及滤泡细胞结构变化的显微观察
• 2.2.2 卵黄发生的超微观察
• 2.3 讨论
• 2.3.1 卵黄物质的来源
• 2.3.2 线粒体在卵黄发生中的作用
• 2.3.3 溶酶体在卵黄发生中的作用
• 2.3.4 卵黄球的结构
• 2.3.5 滤泡细胞与卵母细胞通过微胞饮泡和微绒毛进行物质交换
• 2.3.6 滤泡细胞的出现、发育及退化和卵子发生过程具有同步性
• 第3章 卵黄蛋白抗血清的制备与检验
• 3.1 材料与仪器
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验仪器
• 3.1.3 实验试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 卵巢粗提液的制备
• 3.2.2 卵黄蛋白的鉴定
• 3.2.3 电泳洗脱纯化卵黄蛋白
• 3.2.4 抗体制备
• 3.2.5 抗血清的效价检测
• 3.2.6 抗血清的特异性检测
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 卵黄蛋白的鉴定与纯化
• 3.3.2 蛋白含量标准曲线
• 3.3.3 抗血清效价的检测结果
• 3.3.4 抗血清特异性的检测结果
• 3.4 讨论
• 第4章 中华锯齿米虾卵黄发生的免疫酶组化研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器与试剂
• 4.2 实验结果
• 4.3 讨论
• 结语
• 参考文献
• 图版说明
• 缩略词（ABBREVIATIONS）
• 图版
• 致谢