HIF-1α对缺氧微环境下垂体腺瘤侵袭机制调控的研究

论文摘要

目的：检测缺氧诱导因子（HIF-1α）在垂体腺瘤中的表达及其和肿瘤侵袭性的关系。通过慢病毒载体RNAi调控HIF-1α的表达，观察缺氧微环境对原代培养的垂体腺瘤细胞（PACs）侵袭性生物学行为的影响。材料和方法：免疫组化检测HIF-1α、MMP-9、VEGF在垂体腺瘤组织中的表达，同时以RT-PCR检测HIF-1α、MMP-9、VEGF的mRNA水平，分析上述指标和肿瘤侵袭性的关系。原代培养、纯化PACs，观察其体外生长、迁移表现，流式细胞仪检测细胞周期，免疫荧光检测其激素受体表达。设计HIF-1αShRNA序列，构建pRNAT-U6．2慢病毒载体，稳定转染PACs，RT-PCR、Western-blot检测干扰效率。建立PACs缺氧模型和体外侵袭模型（Boyden小室），检测HIF-1α表达变化，并通过RNAi调节HIF-1α表达水平，观察PACs侵袭能力的变化。结果：HIF-1α蛋白的阳性染色主要分布在PACs胞浆和周围的部分血管内皮细胞中，HIF-1α蛋白和mRNA水平和肿瘤侵袭性密切相关，和VEGF、MMP-9无明显相关性。培养获得高纯度的PACs，侵袭性垂体腺瘤来源的PACs具有较强的增殖、迁移、侵袭能力。在缺氧条件下培养24h以内的PACs的HIF-1α表达明显上调。获得高滴度（5*105 TU／well）的慢病毒载体，转染PACs后通过Western-blot显示HIF-1α在mRNA和蛋白水平都得到明显抑制。体外侵袭实验显示受RNAi干扰后的PACs侵袭能力下降。结论：HIF1-α参与垂体腺瘤的侵袭生长机制。抑制HIF1-α的表达是控制侵袭性垂体腺瘤的可行途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 HIF-1α在垂体腺瘤的表达及其与肿瘤侵袭性的关系
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 垂体腺瘤细胞原代培养、纯化、体外生物学行为观察
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 慢病毒载体RNAi抑制垂体腺瘤细胞HIF-1α表达
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第四部分 缺氧微环境对垂体腺瘤细胞侵袭性生物学行为的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述1
• 文献综述2
• 附录
• 致谢