蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定

蛋白酶活化受体-1单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

背景与目的:蛋白酶活化受体-1(PAR-1)是一种的蛋白质,由425个氨基酸组成,含7个疏水跨膜域,为典型的G蛋白偶联受体。PAR-1广泛分布在各种组织细胞上,包括上皮细胞,血小板,内皮细胞,成纤维细胞,单核细胞,T淋巴细胞,成骨细胞,平滑肌细胞,神经细胞,神经胶质细胞及某些癌细胞系等。PAR-1具有广泛的生物学效应,参与诸多疾病的发生发展,因此,我们制备廉价、有效的抗PAR-1mAb具有重要意义。方法:以PAR-1特异性片段为免疫原(13肽)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选可特异性分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞。采用capture ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Dot blot、免疫组织化学染色法、流式细胞分析、激光共聚焦扫描显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果:获得2株可稳定分泌抗PAR-1 mAb的杂交瘤细胞,其亚型分别为IgM,IgG2b。Dot blot检验表明,mAbs可与膜上的抗原结合。免疫组织化学染色表明,mAb与人扁桃体、结肠组织中的淋巴细胞、包皮组织中的成纤维细胞、肺组织中的巨噬细胞反应呈阳性。流式细胞仪分析显示,2株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞膜上及细胞胞浆内的受体均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,A549细胞的胞膜及胞浆内均有荧光标记的阳性反应物。结论:成功地制备抗PAR-1 mAb,为变态反应性疾病,炎症性疾病及其他疾病的研究工作提供了有用的试剂。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 英文缩略语
  • 目录
  • 第1章: 前言
  • 第2章: 材料与方法
  • 一、 实验材料
  • 二、 实验方法
  • 第3章: 实验结果
  • 1.杂交瘤细胞的建立
  • 2.mAb效价及Ig亚类的鉴定
  • 3.mAb的特异性鉴定
  • 第4章: 讨论
  • 第5章: 结论
  • 第6章: 参考文献
  • 综述
  • 附录 主要实验试剂配制
  • 致谢
  • 相关论文文献

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