黑龙江省链格孢属病原菌遗传多样性及杀菌剂抗药性分析

论文摘要

2007～2009年在黑龙江省各地区不同寄主植物上分离了109株链格孢属病原菌,其中Alternaria solani 73株、Alternari brassicola 15株、Alternaria porri 21株。从分离到的A. solani,A. brassicola及A. porri菌株中各挑选一株,并利用ITS1和ITS2通用引物扩增了3种链格孢属病原菌的基因组DNA。扩增结果显示所测定菌株ks09-7的碱基序列与NCBI上注册的A. solani ITS序列之间的同源性为98.35%;所测定菌株gl09-2的碱基序列与NCBI上注册的A. brassicicola ITS序列之间的同源性为97.81%;所测定菌株zb09-10的碱基序列与NCBI上注册的A. porri ITS序列之间的同源性为98.71%。本研究利用生长速率法测定了马铃薯早疫病菌对恶醚唑、腐霉利和戊唑醇的敏感性。恶醚唑的敏感性测定结果表明,不同年份和不同地区分离的马铃薯早疫病菌对恶醚唑的敏感性之间存在着差异,EC50值在0.06439.0666μg·mL-1,最不敏感菌株（nh09-5）的EC50值是最敏感菌株（hg08-20）的141.00倍,平均值为2.5196±2.2025μg·mL-1,抗性指数低于3的马铃薯早疫病菌株有47个,抗性指数在310之间的马铃薯早疫病病菌有3个,说明齐齐哈尔地区讷河市分离的马铃薯早疫病菌已有对恶醚唑产生抗药性的趋势;腐霉利的敏感性测定结果表明,不同年份和不同地区分离的茄链格孢菌对腐霉利的敏感性无显著差异,其敏感性呈连续的单峰曲线分布,EC50值在0.34728.1799μg·mL-1之间,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的23.56倍,平均值为4.4457±0.6019μg·mL-1,未出现敏感性下降的抗药性群体,因此可作为马铃薯早疫病菌对腐霉利的敏感性基线;戊唑醇的敏感性测定结果表明,不同年份分离的马铃薯早疫病菌对戊唑醇的敏感性之间无显著差异,但不同地区分离的马铃薯早疫病菌有一定的差异,其敏感性呈连续的单峰曲线分布,EC50值在3.090323.5613μg·mL-1之间,最不敏感菌株的EC50值是最敏感菌株的7.62倍,平均值为10.3584±1.6331μg·mL-1,未出现敏感性下降的抗药性群体,因此可作为马铃薯早疫病菌对戊唑醇的敏感性基线。总之,腐霉利和戊唑醇可以使用在马铃薯早疫病的防治上,但应注意监测其抗药性的动态变化。利用RAPD技术对分离自黑龙江省哈尔滨市、齐齐哈尔市、牡丹江市、鹤岗市、佳木斯市和加格达奇市等6个地区的90株链格孢属病原菌进行了遗传多样性分析。从20个随机引物中筛选出一条扩增条带清晰,多态性好的引物,并利用NTSYS 2.0进行链格孢属病原菌的聚类分析。结果表明引物OPE-19扩增后产生的各个群体间相似性系数分布在0.601.00。在60.8%相似性水平上可划分为3个主要RAPD组群和8个次要RAPD组群。牡丹江市和齐齐哈尔市分离的马铃薯早疫病菌分别划分为8个RAPD组群。以上结果说明黑龙江省链格孢属病原菌RAPD组群与寄主植物和分离地区之间没有相关性。利用AFLP技术对分离自黑龙江省哈尔滨、齐齐哈尔、牡丹江、鹤岗、佳木斯、加格达奇等6个地区分离的91株链格孢属病原菌进行了遗传多样性分析。在相似性系数为0.66时91个链格孢属病原菌被分为1个主要组群和3个次要组群。在这四个组群中,第一(AG10.66)、第二(AG20.66)和第四(AG40.66)组群属于由大孢子种组成的链格孢属病原菌,而第三组群(AG30.66)绝大多数属于由小孢子种组成的链格孢病原菌。综合分析上述聚类结果可得出链格孢属病原菌的AFLP组群与孢子类型有一定相关性,而链格孢属病原菌的AFLP组群与分离地区之间没有相关性。在相似性系数为0.72时91个链格孢属病原菌被分为2个主要组群和10个次要组群。在这12个组群中,第一(AG10.72)、第二(AG20.72)和第三组群(AG30.72)主要由葱链格孢菌组成,第四(AG40.72)、第五(AG50.72)、第六(AG60.72)、第七(AG70.72)、第八(AG80.72)和第十二组群(AG120.72)全部由茄链格孢菌组成,而第九(AG90.72)、第十(AG100.72)和第十一组群(AG110.72)主要由芸薹链格孢菌组成。链格孢属病原菌的AFLP组群与寄主植物之间有一定的相关性,而与分离地区之间没有相关性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 1.1 链格孢属病原菌的危害
• 1.2 链格孢属病原菌的生物学特性
• 1.2.1 马铃薯早疫病
• 1.2.2 大葱紫斑病
• 1.2.3 甘蓝黑斑病
• 1.2.4 链格孢属病原菌次生代谢物
• 1.3 链格孢属病原菌对杀菌剂的抗药性
• 1.4 链格孢属病原菌的遗传多样性研究
• 1.4.1 可溶性蛋白质和同工酶分析
• 1.4.2 RFLP 分析
• 1.4.3 RAPD 分析
• 1.4.4 rDNA 序列分析
• 1.4.5 AFLP 分析
• 1.6 研究的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 供试材料
• 2.1.1 供试试剂
• 2.1.2 供试器材
• 2.1.3 供试培养基
• 2.2 病原菌的分离与鉴定
• 2.2.1 病原菌分离
• 2.2.2 形态学鉴定
• 2.2.3 分子鉴定
• 2.3 马铃薯早疫病菌对杀菌剂敏感性测定
• 2.4 链格孢属病原菌的遗传多样性分析
• 2.4.1 链格孢属病原菌的RAPD 分析
• 2.4.2 链格孢属病原菌的AFLP 分析
• 2.4.3 数据统计与分析
• 3 结果与分析
• 3.1 病原菌的分离与鉴定
• 3.1.2 形态学鉴定
• 3.1.3 分子鉴定
• 3.2 链格孢属病原菌对杀菌剂的敏感性反应
• 3.2.1 马铃薯早疫病菌株对恶醚唑的敏感性分析
• 3.2.2 马铃薯早疫病菌株对腐霉利的敏感性分析
• 3.2.3 马铃薯早疫病菌株对戊唑醇的敏感性分析
• 3.3 链格孢属菌株的遗传多样性分析
• 3.3.1 链格孢属病原菌的RAPD DNA 指纹
• 3.3.2 链格孢属病原菌的AFLP DNA 指纹
• 4 讨论
• 4.1 链格孢属病原菌的分离鉴定
• 4.2 抗药性分析
• 4.3 遗传多样性分析
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文