裂蹄木层孔菌子实体水提物体外诱导HepG2细胞凋亡

论文摘要

裂蹄木层孔菌（Phellinus linteus）在东方是著名的有多种生物活性的药用真菌,广泛用于治疗各种疾病,如口腔溃疡、胃肠紊乱、炎症、淋巴疾病和各种癌症。通常认为P.linteus对于癌细胞没有直接的毒性,但对于P.linteus子实体水提物（WEPL）直接作用于癌细胞的研究鲜见报道,其抗肿瘤机制也不清楚。本文研究发现WEPL对HepG2人类克隆癌细胞系有直接的抗增殖作用。用0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL/mL WEPL处理HepG2细胞24、48、72h后,MTT法可见WEPL对体外培养的细胞有明显的抑制作用,与对照组相比有明显差异。其抑制细胞增殖作用呈浓度和时间依赖性;透射电镜下细胞表现为细胞固缩,胞质空泡化,凋亡小体形成。流式细胞仪技术检测到AnnexinⅤ染色呈阳性的出现都是细胞发生凋亡的标志特征。证实WEPL体外直接诱导HepG2细胞凋亡。DNA Ladder同电镜和流式细胞技术所得结果均证实WEPL处理48h后HepG2细胞处于凋亡前期及中期。WEPL对HepG2细胞抗增殖和凋亡的作用与Bax和Bcl-2的诱导有显著关系。RT-PCR和Western Blot分析证实WEPL刺激Bax mRNA和蛋白表达量上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达量下调进而诱导了细胞凋亡。结论证实WEPL诱发的人类克隆肝癌细胞系HepG2的细胞凋亡可能是通过上调Bax、下调Bcl-2活性来实现的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 抗肿瘤研究进展
• 1.2 P.linteus研究进展
• 1.2.1 P.linteus的培养
• 1.2.2 多糖提取及多糖分子结构
• 1.2.3 P.linteus的药用功能
• 1.2.4 P.linteus的发展应用
• 1.3 细胞凋亡
• 1.3.1 细胞凋亡的概念
• 1.3.2 细胞凋亡的特征
• 1.3.3 细胞凋亡的分子机制
• 1.3.4 细胞凋亡的生化特征检测
• 1.3.5 细胞凋亡的意义
• 2 实验方法
• 2.1 材料、试剂和仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 P.linteus子实体水提物（WEPL）的制备
• 2.2.3 MTT法研究WEPL对HepG2细胞的作用
• 2.2.4 电镜观察超微结构的变化
• 2.2.5 流式细胞术分析
• 2.2.6 DNA Ladder凝胶电泳检测
• 2.2.7 RT-PCR法研究WEPL对Bax和Bcl-2 mRNA转录水平的作用
• 2.2.8 Western Blot法研究Bax和Bcl-2蛋白表达的变化
• 3 结果与分析
• 3.1 MTT结果分析
• 3.2 电镜观察超微结构的变化
• 3.3 流式细胞术结果分析
• 3.4 DNA Ladder结果
• 3.5 RT-PCR法研究WEPL对Bax和Bcl-2 mRNA转录水平的作用
• 3.6 Western Blot法研究Bax和Bcl-2蛋白变化的情况
• 3.6.1 蛋白定量
• 3.6.2 Western Blot研究蛋白变化
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢