含三唑基的杂环化合物诱导肿瘤细胞凋亡的研究

论文摘要

三唑基是一个具有很强生物活性的基团,本实验将三唑基引入到杂环化合物中,用肝癌细胞株BEI-7402、人乳腺癌株MCF-7和小鼠乳腺癌细胞株4T-1对其做了抗肿瘤活性筛选。实验首先合成10种含三唑基的杂环化合物,通过IR、1H-NMR分析表征,得到预期的结构。用肝癌细胞株BEL-7402从中筛选出化合物3-[（4-1H-1,2,3-三唑基-1）-甲基]-4-氨基-5-巯基-1,2,4-三唑（APTMTT）对细胞的抑制率呈明显的浓度和时间依赖性。因此我们们对该化合物做了进一步抗肿瘤研究。实验证明APTMTT可以通过阻滞DNA复制、打断DNA、诱导产生自由基、促使细胞线粒体膜电位去极化、降低ATP酶活性等途径诱导BEI-7402细胞凋亡。在细胞中最早发生的是线粒休膜电位下降,继而引发自由基的产生,DNA的片段化,同时释放出调控凋亡的蛋白Bcl-2和Bax,于是细胞凋亡不可逆转。APTMTT对人乳腺癌细胞株MCF-7和小鼠乳腺癌细胞株4T-1的增殖都有显著的抑制作用,并且可以打断DNA,但不形成DNA-Ladder,只是形成特定长度的片断。也可以引发两种细胞产生自由基、致使线粒体膜电位下降。综上所述,APTMTT对肿瘤细胞生长有很好的抑制作用,并且可以诱导细胞凋亡。其作用途径主要是引发了线粒体膜电位的崩溃,同时激活了细胞内凋亡调控蛋白。本论文为含三唑基的杂环化合物抗癌潜力提供了一个有力证据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 综述
• 2 抗肿瘤药物的研究现状
• 3 抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞凋亡分子机制的研究进展
• 3.1 肿瘤细胞治愈的标志—细胞凋亡
• 3.2 细胞凋亡与坏死的区别
• 4 抗肿瘤药物的研究前景
• 5 含三唑基的化合物成为新型抗肿瘤药可能性理论基础
• 5.1 简介
• 5.2 含三唑基的化合物生物活性
• 5.3 小结
• 6 论文设计和研究内容
• 第二章 化合物的合成及结构表征
• 1 实验部分
• 1.1 仪器与试剂
• 1.2 实验方法
• 2 结构表征
• 2.1 化合物元素分析
• 2.2 化合物的IR 分析
• 2.3 化合物的1H-NMR 分析
• 第三章 含三唑基的化合物抗肿瘤活性的研究
• 1 实验部分
• 1.1 研究对象
• 1.2 试剂
• 1.2.1 所用主要试剂及生产厂家
• 1.2.2 试剂的配制
• 1.3 实验仪器
• 1.4 实验原理与实验方法
• 1.4.1 细胞的培养
• 1.4.2 细胞生长抑制测定
• 1.4.3 流式细胞仪分析（flowcytometryassay, FCA）
• 1.4.4 DNA 片段化检测
• 1.4.5 线粒体的提取
• 1.4.6 线粒体膜电位的检测
• 1.4.7 细胞内自由基的检测
• 1.4.8 western blot 法检测凋亡调控蛋白
• 1.4.9 细胞内ATPase 活性检测
• 2 实验结果
• 2.1 含三唑基的化合物作用于肝癌细胞BEL-7402
• 2.1.1 细胞凋亡与肝癌的发生简介
• 2.1.2 化合物对BEL-7402 细胞活性的测试
• 2.1.3 细胞凋亡检测结果
• 2.1.4 APTMTT 对BEL-7402 细胞线粒体膜电位的影响
• 2.1.5 APTMTT 对BEL-7402 细胞内自由基含量的影响
• 2.1.6 VC 和CsA 对细胞活性、自由基和DNA 的影响
• 2.1.7 Ca2+-ATPase 活性的变化
• 2.1.8 凋亡调控蛋白Bcl-2 和Bax 的检测
• 2.2 含三唑基化合物APTMTT 作用于小鼠肝脏线粒体
• 2.2.1 APTMTT 对鼠肝线粒体膜电位的影响
• 2.2.2 APTMTT 对鼠肝线粒体自由基的影响
• 2.3 含三唑基化合物APTMTT 作用于乳腺癌细胞
• 2.3.1 APTMTT 对乳腺癌细胞株生长抑制作用
• 2.3.2 APTMTT 对乳腺癌细胞株DNA 的影响
• 2.3.3 APTMTT 对乳腺癌细胞内自由基含量的影响
• 2.3.4 APTMTT 对乳腺癌细胞线粒体膜电位的影响
• 第四章 讨论
• 1 APTMTT 对肝癌细胞株的作用
• 2 APTMTT 对乳腺癌细胞株的作用
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录