福建省柑橘根部1种根结线虫新种的鉴定

福建省柑橘根部1种根结线虫新种的鉴定

论文摘要

在福建省顺昌县山区一柑橘园发现严重的柑橘根结线虫病,本文对该根结线虫病的症状特点进行了详细描述。通过形态学特征、酯酶和苹果酸脱氢酶酶谱分析、寄主范围测定、分子生物学等方法对根结线虫种进行了鉴定,发现该线虫与已描述的根结线虫种存在明显差异,定为根结线虫新种,并根据采集地,暂定名为顺昌根结线虫(Meloidogyne shunchangensis n. sp.),同时对柑橘根部其他寄生线虫种类进行了鉴定。顺昌根结线虫能侵染枳(Poncirus trifoliata),产生根结,根结特点为形成根系中轴为中心,在根系及营养根根尖上形成大小不等的念珠状根结;根结处直接产生侧根,侧根受侵染,产生次生根结。在寄主范围中,顺昌根结线虫不能寄生大豆、花生和烟草,对豇豆、黄瓜、番茄、西瓜、辣椒轻微侵染。在这些寄主上,侵染根系根结小,以根系中轴为中心隆起,表现为串珠状,根结上可长出细根特点。雌虫会阴花纹特征为为圆形或卵圆形,背弓中等或偏高,线纹细密;线纹以尾端为中心,线纹包至阴肛两侧,阴肛间大多无线纹或少数线纹通过,肛门下方常有一角质膜加厚隆起成脊状;侧尾腺口大且明显,圆形;侧尾腺口距离略宽于阴门宽度;侧区有变异,无侧线,或在一侧或两侧形成较明显单侧线或内双侧线。雌虫唇盘隆起,背、腹部的中唇中间分开形成2个明显分开的次唇片,侧唇大,近方形。雌虫排泄孔开口距口针基部球远,EP/ST平均为2.7。雄虫头部唇盘与中唇融合,唇盘与中唇形成哑铃状结构;头区无环纹,口针粗直,平均长度为17.8μm,体中部具有4条明显侧线,中间脊间有1条浅侧线,靠外侧2条侧带有网纹通过;二龄幼虫体长相对短,平均值为332.7μm,有一个相当长的口针,均值达13.4μm,直肠膨大,尾部短,平均为24.2μm,尾端钝圆,透明区短,平均为4.3μm。通过同工酶分析发现,顺昌根结线虫的苹果酸脱氢酶(Mdh)谱带有2条,1条为Rm值为37.9%的强条带,1条为Rm值为23.7%的弱条带;酯酶谱带Rm值为55.7%,属于新的谱型。对顺昌根结线虫rDNA ITS区及28S D2-D3区序列进行了PCR扩增、克隆与测序,通过与GenBank数据库进行比对,顺昌根结线虫可与其他根结线虫明显区分开。基于ITS1-5.8S-ITS2序列比对分析,与其他根结线虫的同源性为75%-81%;基于D2-D3序列比对分析,与其他根结线虫的同源性为79%-84%。基于ITS1-5.8S-ITS2或D2-D3序列,用NJ法构建的系统发育树表明顺昌根结线虫可与其他线虫明显分开。对柑橘根结线虫病发生地柑橘根部其他寄生线虫进行了鉴定,其中鉴定出10属5种,这5个种分别为假强壮螺旋线虫(Helicotylenchus pseudorobustus)、小型拟鞘线虫(Hemicriconemoides minor)、布科维纳针线虫(Paratylenchus bukowinensis)、美洲剑线虫(Xiphinema americanum group)、湖南剑线虫(Xiphinema hunaniense),同时对柑橘根部线虫种群结构进行了初步分析。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 引言
  • 1 柑橘寄生线虫种类研究概况
  • 1.1 柑橘上重要寄生线虫种类
  • 1.1.1 柑橘半穿刺线虫(Tylenchulus semipenetrans)
  • 1.1.2 相似穿孔线虫(Radopholus similis)
  • 1.1.3 根腐线虫(Pratylenchus spp.)
  • 1.1.4 柑橘根结线虫(Meloidogyne spp.)
  • 1.2 根结线虫分类现状
  • 1.2.1 传统分类鉴定
  • 1.2.2 同工酶电泳鉴定
  • 1.2.3 根结线虫分子生物学分类和检测
  • 2 本研究目的与意义
  • 3 技术路线
  • 第二章 柑橘根部1 种根结线虫的鉴定
  • 1 材料与方法
  • 1.1 采集地点
  • 1.2 症状观察及样本的采集
  • 1.3 根结线虫的分离
  • 1.4 根结线虫种群的纯化与保存
  • 1.5 线虫标本的固定与观测
  • 1.6 寄主范围测定
  • 1.7 同工酶电泳
  • 1.8 分子生物学鉴定
  • 2 结果与分析
  • 2.1 为害症状
  • 2.2 测量值及形态描述
  • 2.2.1 雌虫
  • 2.2.2 雄虫
  • 2.2.3 二龄幼虫
  • 2.2.4 卵
  • 2.3 鉴别特征及与其他相近种的区别
  • 2.3.1 鉴别特征
  • 2.3.2 与其他相近种的区别
  • 2.4 寄主范围及根结严重度分级
  • 2.5 酯酶与苹果酸酶谱分析
  • 2.6 IT51-5.85-IT52 区和D2-D3 区PCR 扩增、测序及比对分析
  • 3 讨论
  • 3.1 形态学的鉴定
  • 3.2 顺昌根结线虫引起的根结症状特点
  • 3.3 酯酶与苹果酸酶谱法鉴定
  • 3.4 分子生物学鉴定与系统发育树分析
  • 第三章 柑橘根部其他植物寄生线虫的鉴定
  • 1 材料与方法
  • 1.1 线虫种群的采集与保存
  • 1.2 线虫的分离
  • 1.3 线虫的杀死与固定
  • 1.4 观察样本的制作
  • 1.5 属、种的鉴定
  • 2结果与分析
  • 2.1 柑橘根部主要线虫种类
  • 2.1.1 假强壮螺旋线虫 Helicotylenchus pseudorobustus Golden,1956
  • 2.1.2 小型拟鞘线虫 Hemicriconemoides minor Brzeski & Reay, 1982
  • 2.1.3 布科维纳针线虫 Paratylenchus bukowinensis Micoletzky, 1922
  • 2.1.4 美洲剑线虫 Xiphinema americanum group(图 2.5)
  • 2.1.5 湖南剑线虫 Xiphinema hunaniense Wang&Wu,1992(图 2.6)
  • 3 讨论
  • 第四章 总结及展望
  • 1. 本研究的主要成果与创新点
  • 2. 下一步需要开展工作
  • 参考文献
  • 附录一:溶液配制
  • 附录二:ITS 区序列比对结果
  • 附录三:D2-D3 区序列比对结果
  • 致谢
  • 相关论文文献

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