中药通过激活PPARs治疗糖尿病胰岛素抵抗机制的研究及新型胰岛素增敏剂的筛选

论文题目: 中药通过激活PPARs治疗糖尿病胰岛素抵抗机制的研究及新型胰岛素增敏剂的筛选

论文类型: 博士论文

论文专业: 中医及内分泌代谢疾病

作者: 于海燕

导师: 潘长玉,母义明,陆菊明

关键词: 质粒,细胞,细胞

文献来源: 中国人民解放军军医进修学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 进行PPARγ、PPARα、PPRE表达载体的构建、扩增与提取,组建具有较高灵敏性的PPRE荧光素酶筛选系统。方法 用RT-PCR方法扩增小鼠PPARγ和PPARα DNA片段,重组到pCMX表达质粒,将合成的PPRE DNA亚克隆到pGL3荧光素酶表达质粒,提取质粒DNA。应用脂质体（SuperFect）将pGL3-CMV、PPARγ和PPRE与pRL转染COS-7细胞和HepG2细胞,24h后分别加入pGL3-CMV及不同剂量的吡格列酮（PGZ）,继续孵育24h,应用双报告荧光素酶基因检测系统检测荧光素酶活性。结果 （1）提取后的PPARγ、PPARα及PPRE表达载体,经测序证实无突变插入方向正确,表达载体以环状DNA为主。（2）pGL3-CMV明显增强荧光素酶活性为对照组的14.9倍（P<0.01）,PGZ呈剂量依存性地增强PPARγ活性,PGZ 10-5达到最高值为对照组的6.1倍（P<0.01）;（3）PGZ10-6、10-5增强HepG2细胞荧光素酶活性分别为对照组的3.6（P<0.01）、5.4倍（P<0.01）。结论 成功地进行了PPARγ、PPARα、PPRE质粒的构建、扩增与提取,组建了具有较高敏感性的PPARs表达筛选系统。

论文目录:

本课题研究背景

第一部分 PPAR和PPRE表达载体的构建和荧光素酶筛选系统的建立

摘要

前言

研究内容

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分 具有激活PPARγ和PPARα作用的中药筛选

摘要

前言

研究内容

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第三部分 中药提取物A、B对HepG2细胞PPARγ、RXRα mRNA和蛋白质表达的影响

摘要

前言

研究内容

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第四部分 中药提取物A、B对PPARα mRNA、蛋白的影响

摘要

前言

研究内容

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

小结

发表论文

致谢

发布时间: 2006-07-25

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标签：质粒论文;  细胞论文;