组蛋白去乙酰化酶抑制剂与蛋白酶体抑制剂协同抑制乳腺癌细胞及分子机制研究

论文摘要

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂SBHA（Suberic bishydroxamate/Suberoylbishydroxamic acid）对MCF-7、MDA-MB-231人乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用及其与蛋白酶体抑制剂Bortezomib或MG -132的协同作用,并进一步在MCF-7细胞中探讨SBHA单药及联合用药的分子机制。方法:首先采用不同浓度梯度或不同时间梯度SBHA单药处理乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231。采用WST方法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测经不同的SBHA单药处理后MCF-7、MDA-MB-231的生长情况及凋亡率,同时在显微镜下观察细胞形态变化并拍照。采用Hoechst33258染色,在荧光显微镜下观察细胞核形态变化。流式细胞术分析SBHA单药处理后细胞周期变化。为了进一步研究SBHA与蛋白酶体抑制剂的联合作用,将细胞按照药物处理方式分为（1）对照组;（2）SBHA组;（3）Bortezomib组;（4）SBHA+Bortezomib组;（5）MG-132组;（6）SBHA+MG-132组。采用WST方法、平板集落形成法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测上述不同药物处理对MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖能力的影响和凋亡诱导的作用。同时我们分别采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术分析MCF-7细胞经上述不同组处理后DNA片段及细胞周期的变化。然后,我们采用RT-PCR及Western Blot分析上述不同组药物处理72小时后MCF-7细胞株中p21、p27、p53、Bcl-2家族成员（bcl-2、Bax、Bcl-Xs、Bim、Bak）、smad通路（smad2、smad4、CTGF）及JNK/c-Jun通路（JNK、p-c-Jun、c-Jun）的变化。结果:WST法和流式细胞术检测结果示SBHA单药对MCF-7、MDA-MB-231细胞均有增殖抑制和凋亡诱导作用,且随着药物浓度增加和时间延长而增强,并引起细胞周期G0-G1期阻滞。相差显微镜下见细胞形态发生明显变化,浆核比例缩小,荧光显微镜下观察见典型的凋亡小体。SBHA联合Bortezomib或MG-132对MCF-7、MDA-MB-231细胞的生长抑制及凋亡诱导作用明显增强,联合系数小于1。琼脂糖凝胶电泳可见不同药物处理组均有DNA梯状条带。SBHA联合Bortezomib或MG-132主要引起细胞周期G2-M期阻滞。采用SBHA单药稍升高p27mRNA水平,明显上调与细胞周期相关的p21、p27、p53蛋白的表达,SBHA联合Bortezomib或MG-132后进一步上调p21及p53的表达,p27蛋白未见进一步上升。SBHA与Bortezomib/MG-132联合后smad4 mRNA表达水平见升高,同样smad 2略有升高。SBHA单药时smad信号通路下游基因CTGF表达水平稍升高,与MG-132联合后明显上升。SBHA单药下调Bcl-2基因转录及蛋白水平表达,联合用药后下调更明显。SBHA单药及联合用药明显上调Bax、Bcl-Xs、SBHA单药明显上调Bim蛋白表达,联合用药后Bim表达水平较单药时下降。SBHA与Bortezomib/MG-132联合后上调JNK及磷酸化c-Jun蛋白水平的表达。结论:SBHA单药能够以剂量依赖和时间依赖方式抑制人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖并诱导凋亡,引起细胞周期G0-G1期阻滞。SBHA与Bortezomib或MG-132协同抑制MCF-7和MDA-MB-231的生长并诱导凋亡,引起细胞周期G2-M期阻滞。SBHA单药或与Bortezomib或MG-132联合可通过上调与细胞周期相关的p21、p27、p53蛋白水平,抑制细胞生长;可能通过调节Bcl-2家族蛋白表达（下调Bcl-2、上调Bax、Bcl-Xs及Bim）,恢复smad通路（上调smad2、smad4、CTGF）及激活JNK╱c-jun通路（上调JNK及磷酸化c-Jun）诱导细胞凋亡。总之,在乳腺癌细胞中,SBHA单药或与其他药物联合可能通过多种信号通路影响细胞周期进程,诱导细胞凋亡,从而抑制细胞生长。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SBHA对MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用的研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 蛋白去乙酰化酶抑制剂SBHA与蛋白酶体抑制剂Bortezomib或MG-132协同抑制MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分 组蛋白去乙酰化酶抑制剂SBHA与蛋白酶体抑制剂Bortezomib或MG-132协同抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡的分子机制研究
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录:
• 英文缩写说明
• 攻读学位期间发表的学术论文和综述
• 学术会议
• 致谢