接骨木提取物抗骨质疏松作用及作用机理研究

论文题目: 接骨木提取物抗骨质疏松作用及作用机理研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 药理学

作者: 解芳

导师: 吴春福

关键词: 接骨木,骨质疏松,卵巢切除术,碱性磷酸酶活性,骨密度,骨生物力学,骨组织形态计量学,骨钙素,尿脱氧吡啶酚,成骨细胞,反转录聚合酶链式反应,免疫印迹法

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 接骨木(Sambucus williamsii Hance)是传统骨伤科草药。本论文采用3月龄雌性SD大鼠双侧卵巢切除建立成年大鼠骨质疏松模型，以雌二醇为阳性对照药物，考察接骨木提取物对卵巢切除骨质疏松大鼠的作用。卵巢切除1月后，将卵巢切除大鼠随机分为5组：假手术组(sham，n=8)，模型组(OVX，n=8)，接骨木低剂量组(SW30)，接骨木高剂量组(SW60)和雌激素替代组(E2)每日灌胃给药一次，连续灌胃90天，药物剂量分别是：SW30(300 mg／kg／d)，SW60(600 mg／kg／d)，E2(2 mg／kg／d)。收集血样、尿样、骨骼组织和子宫组织样本，子宫称重，计算子宫脏器系数。采用全自动生化分析仪测定血清Ca，P，碱性磷酸酶(ALP)以及尿Ca，P和肌酐的量，计算尿中Ca／肌酐和P／肌酐比值。利用ELISA试剂盒测定血清骨钙素和尿脱氧吡啶酚的量。采用pQCT法测定大鼠胫骨近端松质骨骨密度；采用三点弯曲实验考察大鼠股骨骨生物力学参数；取胫骨近端制成不脱钙骨切片进行骨组织形态计量学分析。为了深入研究接骨木的抗骨质疏松作用机理，考察接骨木对大鼠股骨近端骨骺Ⅰ型胶原蛋白的表达和子宫ERα的表达。同时检测接骨木提取物及其活性组分化合物对大鼠成骨样细胞UMR106增殖和碱性磷酸酶活性的影响，采用半定量RT-PCR法测定成骨样细胞中骨相关基因mRNA的表达水平。利用骨组织块移行法建立新生大鼠颅骨成骨样细胞，测定接骨木提取物对其增殖和分化的作用，并研究接骨木中提取分离得到的化合物16对大鼠颅骨成骨样细胞中骨相关基因的转录表达水平的影响。实验结果显示，与假手术组相比，去卵巢大鼠血清钙、磷浓度没有变化，ALP活性增强，血清骨钙素的量增加，尿钙排出显著升高，尿中脱氧吡啶酚(DPD)含量显著增加，子宫萎缩。胫骨近端骨密度明显减少，骨小梁面积百分比(％Tb.Ar)降低，骨小梁间隙(Tb.Sp)增加，骨小梁连结减少，股骨的最大载荷、股骨刚性以及能量吸收显著降低。灌胃给予去卵巢大鼠雌二醇或接骨木提取物3个月，血清ALP活性降低，尿钙排出量减少，尿中DPD／Cr比值降低，胫骨近端骨密度增加，骨小梁增加，骨小梁间隙减小，大鼠股骨生物力学性能加强。接骨木提取物对去卵巢大鼠子宫脏器系数没有明显影响，而雌激素则刺激去卵巢大鼠子宫生长。接骨木提取物能够促进去卵巢大鼠股骨干骺端Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达和蛋白表达水平，同时对去卵巢大鼠子宫雌激素受体α(estrogen receptor α，ERα)的mRNA表达没有影响。证明接骨木提取物具有同雌激素类似的抗骨质疏松活性，通过降低雌激素缺乏导致的骨转化亢进，抑制骨吸收偶联骨形成，抑制骨丢失，增加骨强度，改善骨小梁结构。另一

论文目录:

中文摘要

英文摘要

缩略语说明

绪论

第一章 接骨木对卵巢切除大鼠骨质疏松症的作用

前言

第一节 实验方法

1.材料

2.方法

第二节 实验结果

1.卵巢切除手术1个月后假手术组(m-sham)和模型组(m-OVX)大鼠各项指标的比较

2.不同月龄雌性SD大鼠骨代谢、骨密度、骨生物力学性质的比较

3.接骨木提取物对去卵巢致大鼠骨质疏松模型骨代谢的影响

第三节 讨论

小结

第二章 接骨木提取物对卵巢切除大鼠骨质疏松症作用机理的研究

前言

第一节 实验方法

1.反转录-链式聚合反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测大鼠股骨近端干骺Ⅰ型胶原蛋白α1链mRNA的表达

1.1 大鼠右侧股骨近端干骺部总RNA的提取

1.2 反转录-链式聚合反应(RT-PCR)

2.免疫印迹法(western blotting)测定大鼠股骨干骺端Ⅰ型胶原蛋白的表达

3.RT-PCR法检测大鼠子宫中雌激素受体mRNA表达

第二节 实验结果

1.接骨木提取物对去卵巢骨质疏松大鼠股骨近端干骺Ⅰ型胶原蛋白α1链mRNA表达的影响

2.接骨木提取物对去卵巢骨质疏松大鼠股骨干骺端Ⅰ型胶原蛋白表达的作用

3.接骨木提取物对去卵巢大鼠子宫ERα mRNA表达的作用

3.1 去卵巢一个月后子宫雌激素受体ERα mRNA表达的变化

3.2 接骨木提取物对去卵巢大鼠子宫ERα mRNA表达的影响

第三节 讨论

小结

第三章 接骨木提取物及其活性组分对大鼠成骨样细胞UMR106增殖、分化以及功能作用的研究

前言

第一节 实验方法

1.大鼠成骨样细胞UMR106的培养

2.MTT法测定UMR106细胞的增殖

3.ALP活性检测方法

4.RT-PCR法检测UMR106细胞中骨相关基因的表达

5.药物配制方法

6统计方法:

第二节 实验结果

1.接骨木总提取物(SWH)及其水(SWW)、氯仿(SWC)、乙酸乙酯(SWE)萃取组分对大鼠成骨样细胞UMR106增殖的作用

2.SWH、SWC和SWE对大鼠成骨样细胞UMR106细胞中ALP活性的影响

3.SWC对大鼠成骨细胞样细胞OPG／RANKL mRNA表达水平的影响

4.SWE对大鼠成骨样细胞中OPG及RANKL mRNA表达水平的影响

5.接骨木中分离得到两个木脂素化合物对大鼠成骨样细胞系UMR106的作用

5.1 接骨木化合物16对UMR106细胞ALP活性的影响

5.2 接骨木化合物16对UMR106细胞骨相关基因表达的影响

5.3 接骨木化合物36对UMR106细胞ALP活性的作用

5.4 接骨木化合物36对大鼠成骨细胞样细胞UMR106细胞骨相关基因表达的影响

第三节 讨论

小结

第四章 接骨木木脂素化合物对新生大鼠颅骨成骨细胞的作用

前言

第一节 实验方法

1.新生大鼠颅骨成骨样细胞体外培养模型的建立

1.1 材料

1.2 方法步骤

2.MTT法检测接骨木提取物SW以及活性萃取组分对新生大鼠颅骨成骨样细胞增殖的作用

3.RT-PCR法考察接骨木化合物16对新生大鼠颅骨成骨细胞骨相关基因表达的作用

第二节 实验结果

1.新生大鼠颅骨成骨细胞模型研究

2.接骨木总提取物及其活性萃取组分SWC和SWE能够促进大鼠颅骨成骨细胞的增殖

3.接骨木化合物16对新生大鼠颅骨成骨细胞骨相关基因表达的作用

3.1 接骨木化合物16对新生大鼠颅骨成骨样细胞特异性转录因子CbfαlmRNA表达的作用

3.2 接骨木化合物16对新生大鼠颅骨成骨样细胞分化功能标志基因mRNA表达的作用

3.3 接骨木化合物16对新生大鼠颅骨成骨样细胞中破骨细胞形成调节细胞因OPG／RANKLmRNA表达的作用

第三节 讨论

小结

第五章 结论

参考文献

致谢

个人简历

发布时间: 2006-11-27

参考文献

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