论文摘要
器官供体来源不足一直是器官移植所面临的严峻问题,如能寻找到理想的异种器官来代替将是解决问题的有效途径。由于猪的器官在形态、生理生化等多方面与人相似,因此猪是进行异种器官移植的理想选择。但移植的排斥反应和移植物的抗宿主病一直都是亟待解决的事情。过去的研究主要集中在主要组织相容性复合体（maior histocompatibility complex,MHC）,尤其是人白细胞抗原（HLA）和鼠H-2抗原。但研究表明,还有一些MHC之外的编码区编码的产物也能够引发免疫应答,即所谓的次要组织相容性抗原（minor histocompatibility antigens,miHAg）,它们是在MHC限制下被细胞毒T细胞和辅助T细胞识别。大量研究表明,即使MHC相同,miHAgs不同的个体之间进行异基因移植后亦能产生移植物抗白血病（GVL）。即miHAgs的编码基因可以在MHC完全相合的骨髓移植供、受者之间诱发明显的T细胞反应。PANE1（proliferation associated nuclear element 1）基因编码一个新的次要组织相容性抗原HLA-A*0301。研究表明该基因在休眠期的CD19+细胞和B型慢性淋巴性白血病细胞中高表达,可作为在治疗慢性淋巴性白血病的一个潜在靶点。TncRNA是从本室LongSAGE文库中分离得到的一种长非编码RNA,它在猪胎儿骨骼肌发育过程中是上调表达的,且在通城和长白猪妊娠第90天胎儿骨骼肌差异表达。其他物种上的研究表明该非编码RNA在多种病毒感染以及发育相关表达性文库中差异表达,但其基本的分子结构和生物学功能还不清楚。本研究从候选基因的角度,通过克隆、染色体定位、组织表达谱分析、SNP检测和群体分型以及初步的性状关联分析,为进一步研究该基因的功能打下基础,并为为猪的功能基因组领域积累新的基础资料,为猪的分子标记辅助选择提供新的思路。主要研究结果如下:1.依据人PANE1基因cDNA信息,通过由生物信息学及比较基因组学的策略获得的猪EST重叠群设计的猪特异引物克隆出猪PANE1基因特异片断。2.用猪×仓鼠辐射杂种板将新分离的PANE1基因进行了染色体精细定位,该基因定位在SSC5,与AC02位点连锁（LOD=4.91）。3.采用RT—PCR方法检测了PANE1基因在五指山小型猪的心,肝,脾,肺,肾,肌肉,脂肪7个组织中的表达差异,PANE1基因在各组织中均表达,但在脾脏和淋巴组织表达水平相对较高。4.运用PCR-RFLP方法,检测了PANE1基因1个位点的多态性,分析了不同猪种中的基因频率和基因型频率,以及各等位基因在不同猪品种中的分布差异。5.以本室与通城县畜牧局种畜场合作所建立的实验群体（含长白猪22头、大白猪23头、通城猪58头、长大通23头、大长通21头）为材料,分析了PANE1基因的DNA多态位点与部分生长性状的关联,结果发现:与眼肌宽度和腰荐结合处膘厚存在相关。6.以355头长白猪（含父本17头,母本36头,子代302头）为材料,分析了PANE1基因的DNA多态位点与部分免疫性状的关联,结果发现:与0天的RBC分布宽度,17天的淋巴细胞数,32天的平均HGB量和32天的淋巴细胞绝对值存在关联。7.以355头长白猪（含父本17头,母本36头,子代302头）为材料,分析了TncRNA基因的多态位点与免疫性状的关联分析。结果发现此多态位点与0日龄的平均RBC体积（MCV）,32日龄的血小板体积（MPV）和大血小板比率（PL）等免疫指标存在显著关联（P＜0.05）;与32日龄的平均HGB量（MCHC）和血小板分布宽度（PDW）等免疫指标存在极显著关联（P＜0.01）