论文摘要
目的:研究蛇床子素对成骨-破骨细胞共育体系中成骨细胞增殖,分化,特异转录因子CbfalmRNA及相关细胞因子IL-6mRNA表达的影响,探讨蛇床子素对骨代谢影响的可能作用机理。方法:1.取1d龄SD大鼠头盖骨分离培养成骨细胞,取5d龄SD大鼠四肢长骨分离培养破骨细胞,运用琼脂糖凝胶和孔径为0.45μm微孔滤膜建立平面式成骨-破骨共育体系。2.针对成骨细胞单独培养组和成骨-破骨共育组,分别采用MTT法检测成骨细胞生长曲线、PNPP法检测成骨细胞ALP活性、茜素红染色法观察成骨细胞矿化情况。3.用MTT法检测不同浓度蛇床子素在成骨-破骨共育体系中对成骨细胞增殖的影响,筛选出最佳浓度,并以此为基础进行以下的研究。4.观察最佳浓度蛇床子素对成骨-破骨共育体系中成骨细胞增殖分化的影响:分别采用MTT法测各实验组中成骨细胞的增殖率,PNPP法定量检测成骨细胞ALP的活性,偶氮偶联组化分析技术法测定破骨细胞TRAP的活性;5.RT-PCR法测定最佳浓度蛇床子素对成骨-破骨共育体系中成骨细胞IL-6mRNA,CbfalmRNA的表达的影响。结果:1.经考马斯亮蓝法检测蛋白质弥散情况,显示在8h内,蛋白质可以从成骨细胞培养室经过隔膜弥散到破骨细胞培养室,表明平面式共育体系的建立是成功的。2.10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L的蛇床子素对成骨细胞的增殖均有较明显的促进作用,以10-7mol/L浓度的作用最为显著。3.10-7mol/L蛇床子素共育组中成骨细胞的OD值、ALP活性均高于空白对照共育组（P＜0.05）,具有统计学意义;破骨细胞TRAP活性低于空白对照共育组（P＜0.05）,亦具有统计学意义。4.10-7mol/L蛇床子素对共育体系中成骨细胞的IL-6/β-actin比值低于空白对照共育组（P＜0.05）,而Cbfal/β-actin比值高于空白对照共育组（P＜0.05）,差别均具有统计学意义。结论:1.成骨细胞在成骨-破骨共育体系中与单独培养相比,其增殖、分化、矿化能力均较强。2.10-7mol/L蛇床子素能明显增强成骨-破骨共育体系中成骨细胞增殖能力及ALP活性,可提高CbfalmRNA的表达,抑制IL-6mRNA的表达,同时抑制破骨细胞TRAP的活性。