论文摘要
胚胎干细胞和胚胎生殖细胞具有自我更新和多向分化的潜能,检测其全能性的一个非常重要的试验就是将ESCs或者EGCs注射进受体胚胎中,制作嵌合体胚胎,然后将嵌合胚胎移植给同期发情的假孕受体中,观察这种细胞是否能够形成嵌合体动物。本研究探讨了关中奶山羊胚胎生殖细胞是否具有生成嵌合体的能力,并希望能为山羊嵌合体应用研究提供参考。具体试验内容如下:1.从关中奶山羊分离培养的第3～4代EGCs,在0.05%的胰蛋白酶和0.02%的EDTA中作用大约30min,使EGCs消化成5～15个细胞的小团块,然后通过显微操作仪将EGCs团块注射自然交配的黑山羊囊胚或桑椹胚中,29枚嵌合胚胎在CO2培养箱中孵育大约30min,然后移植给9只同期发情的关中奶山羊受体。结果移入两枚嵌合胚胎的1只受体山羊妊娠（No.46）,妊娠147d,产下3只全黑色羔羊。其中2只存活,1只为黑色公羔羊,1只母羔。该母羔羊和畸形死胎头部有片状白毛,畸形死胎羔羊头部白毛较多,裂腹畸形,未见生殖器官。2.筛选10对微卫星引物BMS1004, BMS1290, BM203, BMS875, BMS574, SR-CRSP1, SR-CRSP5, SR-CRSP24, OarAE101和OarFCB11分析了新生羔羊的嵌合情况,结果在位点BMS574明显显示出母羔羊和畸形死胎具有EGCs特异性条带,证明发生了EGCs嵌合。在10对引物中明显显示出新生母羔羊与畸形死胎具有完全相同的带型,而在位点BMS875, BMS574和BMS1004却与新生公羔羊完全不同。证明新生母羔羊与畸形死胎来自于同一枚嵌合胚胎。3.为了进一步证实嵌合的发生,我们用公羊性别决定基因Sry配合Aml-X作为内对照,检测了公羊来源的EGCs得到的嵌合体母羔羊和畸形死胎,结果在母羔羊和畸形死胎中均检测到来源于公羊特异性基因Sry,进一步证明了嵌合的真实性。