IL-1β在AML中的表达及功能的初步研究

论文摘要

目的IL-1β是IL-1家族（IL-1α、IL-1β、IL-1Ra）的重要成员。该基因位于2号染色体长臂2q14。前体蛋白分子量为31KD,成熟IL-1β分子量大小为17KD。IL-1β参与炎症反应、自身性免疫疾病和白血病的发生过程。本论文拟对其在急性髓系白血病（AML）中的功能进行初步研究,并制备鼠抗人IL-1β的单克隆抗体。方法首先,应用RT-PCR及ELISA技术分析4种AML细胞系（HL-60、NB4、SHI-1、K562）中IL-1β的表达水平,并同时构建IL-1β的原核及真核表达质粒。通过真核表达质粒pEGFP-C1-IL-1β转染不表达IL-1β的K562细胞来研究IL-1β对AML细胞增殖的影响。其次,我们应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测不同分期AML病人骨髓标本中IL-1β的表达差异。最后,我们通过构建的原核表达质粒pET-32a（+）-IL-1β,在大肠杆菌BL21（DE3 Lysis）中诱导表达重组蛋白,应用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并制备鼠抗人IL-1β的单克隆抗体。结果HL-60细胞系高表达IL-1β,而K562、NKB4、SHI-1细胞几乎不表达IL-1β。成功构建了真核表达质粒pEGFP-C1-IL-1β,并以此转染K562细胞,结果显示IL-1β的高表达可以促进K562细胞的增殖。实时荧光定量PCR检测不同分期的AML病人中IL-1β的表达差异,结果显示粒细胞白血病未分化型（M1）期、粒细胞白血病部分分化型（M2）及单核细胞型（M5）与早幼粒细胞型（M3）相比,IL-1β的表达水平相对较高,p值分别为:p<0.01,p<0.01及p <0.05。成功构建原核表达质粒pET-32a（+）-IL-1β,在大肠杆菌BL21（DE3 Lysis）中诱导表达重组蛋白,应用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了2株能稳定分泌抗人IL-1β的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结论: IL-1β能促进AML细胞系K562的增殖。早幼粒细胞型（M3）的AML病人骨髓细胞中IL-1β的表达量较粒细胞白血病未分化型（M1）、粒细胞白血病部分分化型（M2）及单核细胞型（M5）相对较低。制备了鼠抗人IL-1β的单克隆抗体,并成功应用于Western blot和流式细胞术检测IL-1β的表达。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 IL-1β 在 AML 细胞系中的表达及功能的初步研究
• 1 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第二部分 IL-1β 在 AML 病人骨髓细胞中的表达及相关性研究
• 1 材料和方法
• 2. 结果
• 3 讨论
• 第三部分 人 IL-1β 的原核表达及单克隆抗体的制备
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3. 讨论
• 总结与展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 缩略词
• 攻读硕士期间公开发表的论文
• 致谢