论文摘要
目的:研究环孢素A（CsA）与内毒素（LPS）对体外培养人牙龈成纤维细胞（GFs）的影响,通过建立CsA诱发牙龈增生的大鼠动物模型来研究牙龈炎症对牙龈增生的影响。方法:实验1.采用改良组织块法培养人GFs,用形态学、免疫细胞化学技术、四甲基偶氮唑蓝比色等方法测定其生物学特性。实验2.用800ng/mlCsA、100ng/mlLPS、800ng/mlCsA +100ng/mlLPS作用于生长良好的第4-8代人GFs, MTT法测定细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清中的TGF-β1分泌的变化。实验3.将18只SD大鼠随机分为三组,每只大鼠于右侧下颌第一磨牙牙颈部结扎正畸用钢丝,各组分别于1、2、4周后处死,观察牙周病变的发展,并确定实验动物牙龈炎发生的时间。实验4.将34只SD大鼠随机分为对照组、单纯结扎组、单纯用药组、结扎+用药组四组,用药组予以CsA每日灌胃9周诱发药物性牙龈增生。取血用ELISA法检测各组血清中TGF-β1含量变化。取下颌磨牙做病理切片,HE染色观察牙周组织变化。结果: 1.人GFs原代培养成功率达到80%,细胞呈梭形,细胞免疫化学检测为波形丝蛋白阳性,I型胶原表达阳性。2.细胞经CsA或LPS作用后形态无明显变化,CsA能促进细胞增殖和分泌TGF-β1, LPS作用与其相反,二者联合作用能明显促进细胞的生长及TGF-β1分泌,比单纯使用CsA作用更明显。3.牙颈部结扎钢丝的方法能成功建立大鼠牙周炎模型,在结扎1周后牙龈即可出现牙龈炎,在第4周时有牙周炎的表现。4.使用CsA油溶液灌胃9周,成功建立大鼠药物性牙龈增生的模型,用药组大鼠体重下降,前后牙牙龈皆有明显增生,炎症+用药组牙龈增生更加明显。用药后大鼠比未用药大鼠血清中TGF-β1的表达量有明显增加,而是否接扎对血清中TGF-β1并没有影响。结论: 1.CsA与LPS在GFs增殖和TGF-β1分泌方面有协同作用。2.牙颈部结扎钢丝的方法可成功建立牙周炎模型,1周后即可出现牙龈炎。3.在炎症存在下,CsA诱发的牙龈增生会更加明显,TGF-β1可能是该发病机制的重要因子。