论文摘要
侵袭性牙周炎是发生于全身健康者的进展迅速、有家族聚集性、不同于慢性牙周炎的一类牙周炎，是造成健康人失牙的主要因素之一。侵袭性牙周炎病因尚未完全明了。以往的研究表明，侵袭性牙周炎的发生与白细胞的功能异常有关。为了进一步研究青少年牙周炎患者中导致白细胞功能异常的致病机理，本实验将正常人与侵袭性牙周炎患者的白细胞进行基因差异性表达分析。目的：研究侵袭性牙周炎患者外周血白细胞的基因表达谱变化，从基因水平了解白细胞在侵袭性牙周炎发生过程中的作用，了解其分子作用机制，寻找与侵袭性牙周炎发病相关的基因。方法：抽取侵袭性牙周炎患者外周血10ml，以正常健康者作为对照，分离其白细胞，抽提白细胞的总RNA和总蛋白，按一步法抽提胞总RNA并纯化mRNA，逆转录合成cDNA进行实时荧光定量PCR，根据实时荧光定量PCR的结果，选择HSP40（DNAJC11的蛋白产物）进行Western-blot。结果：从基因芯片结果中挑选出PTHLH、DNAJC11。通过进行荧光定量PCR，DNAJC11在mRNA水平表现出接近4.5倍的上调。选择HSP40进行Western-blot，HSP40（DNAJC11的蛋白产物）蛋白水平表达显著上调。结论：基因芯片技术虽可有效地筛选出侵袭性牙周炎患者外周血白细胞的差异表达基因，但存在假阳性和假阴性，应用荧光定量PCR技术可以验证芯片检测结果，排除假阳性。在侵袭性牙周炎患者的外周血白细胞中，DNAJC11在mRNA和蛋白水平表达明显升高，其意义有待进一步研究，为进一步研究DNAJC11在侵袭性牙周炎发病中意义提供实验依据。