论文摘要
目的:随着有机锡成为无铅稳定剂的替代品得到普遍应用以来,合成有机锡过程中伴随的杂质TMT也广泛存在于人们生产和生活中;由TMT引起的急性中毒事件屡见不鲜,其造成的危害也越来越严重。既往研究表明TMT可导致人体多个组织器官和系统的损害,其中以中枢神经系统的损伤尤为突出,与之伴随的中枢神经症状表现最为常见;国内外多数研究集中于神经系统,学习记忆功能变化是其研究的重要内容之一,而关于TMT具体作用的研究甚少,并且其具体作用机制尚未明了。本研究拟通过TMT剂量的探讨确定其暴露的实验剂量并建立急性中毒模型,从行为学、组织学、分子生物学不同水平研究TMT对小鼠的神经毒性效应及突触相关蛋白的变化,并探讨给予相关保护剂后突触相关蛋白的变化情况,从多个方面探讨TMT致小鼠学习记忆功能障碍与突触相关蛋白改变的相关性及可能的机制,为深入理解和预测神经毒物对生物体的危害及寻找有效对策。方法:①将69周龄雄性Balb/c小鼠分为生理盐水组（即对照组）和TMT不同剂量组(2.00, 2.25, 2.50, 2.75, 3.00mg.kg-1),均以腹腔注射的方式给药,以Morris水迷宫和组织切片HE染色的结果确定实验用TMT剂量,并以此剂量建立TMT急性暴露模型;②用western检测不同时相点（0h, 1h, 3h, 6h, 12h, 24h）TMT作用Balb/c小鼠海马和皮层GAP-43,SYP蛋白的表达情况;③将小鼠分为对照组、TMT组、TMT+Rutin组、Rutin组,后两组Rutin(10mg.kg-1)均预处理一周,TMT组前6天注射生理盐水;各组最后一次注射24h后行Morris水迷宫,观察小鼠逃逸潜伏期的变化;用western检测各组海马和皮层GAP-43,SYP蛋白表达情况;探讨芦丁预处理后TMT对小鼠行为学的影响,以及对突触相关蛋白GAP-43、SYP表达变化,进而研究芦丁对TMT致小鼠学习记忆能力损伤中可能的保护作用。结果:①经水迷宫实验,对照组和TMT(2.00mg.kg-1)组随着训练次数增加,其逃逸潜伏期均明显缩短,两组逃逸潜伏期差异无统计学意义（P>0.05）;TMT(2.252.75mg.kg-1)各组在四次训练中其逃逸潜伏期未见明显缩短,第四次水迷宫训练时TMT(2.25mg.kg-1)组与生理盐水组逃逸潜伏期相比显著延长（P<0.05）,从第三次水迷宫训练起TMT(2.50mg.kg-1和2.75mg.kg-1)组与生理盐水组逃逸潜伏期相比均显著延长（ P<0.05 ）; HE染色的结果显示, TMT剂量为2.0mg.kg-13.00mg.kg-1,在腹腔注射后24h可引起小鼠大脑皮层的神经元坏死（细胞变小、变尖,核深染）,且随着剂量的增加其细胞坏死的程度加重;在其他脑区域（海马、小脑等）也有不同程度的坏死。②从western的结果看,在各时相点TMT组（024h）与对照组的海马和皮层脑区GAP-43蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）;在TMT（24h）组与对照组的海马脑区SYP蛋白表达相比显著下调（P<0.05）,在TMT（6h24h）组与对照组的皮层SYP蛋白表达相比显著下调（P<0.05）,并有逐渐减弱的趋势。③经水迷宫实验,对照组、Rutin组、TMT+Rutin组随着训练次数的增加,其逃逸潜伏期均明显缩短,TMT组在连续八次水迷宫训练中,小鼠的逃逸潜伏期未明显缩短;从第四次水迷宫训练起TMT组与对照组逃逸潜伏期相比显著延长（p<0.05）,从第五次水迷宫训练起TMT组与TMT+Rutin组逃逸潜伏期相比显著延长（p<0.05）,从第三次水迷宫训练起TMT组与Rutin组逃逸潜伏期相比显著延长（p<0.05）,从数值上看同一次训练中Rutin组比生理盐水组的逃逸潜伏期要短,但两者差异无统计意义（p>0.05）。Western的结果显示, TMT组与对照组、TMT+Rutin组、Rutin组的海马和皮层GAP-43蛋白表达差异均无统计学意义（p>0.05）,TMT组与对照组、Rutin组和TMT+Rutin组的海马和皮层SYP蛋白表达相比显著下调（p<0.05）。结论:①.TMT(2.25mg.kg-1)急性暴露24h后可引起Balb/c小鼠逃逸潜伏期延长,提示TMT导致小鼠学习记忆功能障碍。②TMT作用小鼠后对海马和皮层脑区的突触相关蛋白GAP-43在024h内表达未发现明显变化,对海马和皮层脑区SYP蛋白表达有下调作用,且皮层比海马脑区SYP蛋白表达下调出现的时间更早。③芦丁预处理小鼠一周,再TMT(2.25mg.kg-1)急性暴露24h后,小鼠的逃逸潜伏期未显著延长,提示芦丁对TMT致学习记忆能力的损害有保护效应。④本实验条件下,芦丁预处理后海马和皮层GAP-43蛋白表达无明显变化,但可拮抗海马和皮层SYP蛋白表达下调,提示芦丁对TMT致小鼠学习记忆能力损伤的保护效应可能与拮抗SYP蛋白表达下调有关。