“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株辅助质粒的构建及鉴定

论文摘要

本研究将本实验室分离、鉴定并纯化的NA-1株鹅源副粘病毒进行了基因组RNA的提取,以GenBank收录的ZJ1株鹅源NDV全基因组核苷酸序列为模板设计5对特异性引物,通过RT-PCR方法分段扩增了NP、P和L基因核苷酸序列。本研究为“拯救”鹅源副粘病毒NA-1株而构建的3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,将其分别转染Vero细胞,经G418筛选后,通过间接免疫荧光试验、SDS-PAGE、Western blot来鉴定构建的3个辅助质粒。构建的辅助质粒为鹅源副粘病毒NA-1株的反向遗传操作以及有关功能基因组研究奠定基础。实验研究表明,副粘病毒V蛋白与毒力强弱有关。本研究模拟副粘病毒“RNA编辑”现象,在2次PCR反应过程中,扩增获得了V基因的全长cDNA。将获得的V基因亚克隆到pCI-neo中,将构建的真核表达质粒pCI-V转染Vero细胞,进行间接免疫荧光试验获得绿色荧光,说明真核表达质粒能够表达V蛋白,表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot试验,用全病毒高免血清进行Western blot检测,出现特异性条带。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 鹅源副粘病毒基因组结构及功能的研究进展
• 1 病毒结构及基因组
• 2 编码蛋白及功能
• 3 病毒的演化
• 第二章 反向遗传操作技术在 NDV“拯救”中的应用
• 1 NDV 的复制机制
• 2 反向遗传操作技术在 NDV“拯救”中的研究进展
• 第二篇 研究内容
• 第一章 鹅源副粘病毒NA-1 株NP、P 和L 蛋白基因的克隆及遗传变异研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 “拯救”鹅源副粘病毒NA-1 株辅助质粒的构建及鉴定
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 鹅源副粘病毒NA-1 株V 蛋白基因生物学活性的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介