论文摘要
芦荟属多年生百合科草本植物，原产于非洲的干旱地区，叶片厚实多肉，富含多种活性物质。现代研究证明芦荟具有泻下通便、清肝泄热、消疮杀虫、消炎、抗紫外线辐射、抗病毒、能提高人体免疫机能及滋养毛发等功效，已经被广泛应用于医药、食品、美容化妆产品的生产和研制。随着芦荟产业的发展，芦荟的需求量逐渐扩大，而传统的芦荟繁殖一般采用扦插和分株繁殖，这些方法受繁殖基数的限制，初期繁殖速度较慢，而且容易使病毒积累，影响植株生长，甚至退化。芦荟无性快速繁殖技术是获得大量芦荟种苗的一种重要方法，早在1974年Groenewad E用普勒多利亚种子培养出芦荟愈伤组织植株成功以来，国内外有关芦荟快繁的研究不断深入，已经建立起了相对成型的无性快繁体系。近年来，基于芦荟的药用、美容等功效，人们开始把目光投入到芦荟的遗传转化中，并取得了初步的进展。本文采用芦荟的茎段作为外植体，利用碱性成纤维细胞生长因子基因（bFGF）进行转化芦荟，获得具有祛疤作用的芦荟新品种，为今后开发以此转基因芦荟制成祛疤化妆品奠定了良好的基础，使芦荟这一热带药用植物资源能够更好地服务于人类。主要结果如下：1．建立了芦荟遗传转化受体体系，摸索出不同芦荟品种不定芽的诱导、继代以及生根的有效方法，为芦荟的遗传转化打下了坚实的基础。外植体最佳灭菌条件为用70％的酒精消毒30s，再用0.1％的升汞灭菌8min；不同的芦荟品种均可诱导出不定芽，诱导率的高低主要取决于基因型、培养基种类、激素浓度等。对于不定芽的诱导而言，MS培养基诱导效果优于1／2MS培养基，B5和N6培养基诱导效果较差。就激素而言，在不定芽的诱导和分化阶段，激素配比为6-BA2mg／L+NAA0.15mg／L时的诱导率较高。在芦荟的继代培养阶段，MS+6-BA4.0mg／L+NAA0.1mg／L为最佳的继代培养基，MS+NAA2.0mg／L+活性炭0.3％为最佳的生根培养基。2．农杆菌介导的芦荟遗传转化技术：利用农杆菌介导法将bFGF基因导入木立芦荟中，研究农杆菌转化系统的条件，对不同类型的菌株、不同的菌液浓度、不同的侵染时间等条件进行探讨。通过对农杆菌介导芦荟遗传转化影响因素系统的研究，建立了优化的芦荟转化体系。用继代培养获得的粗壮的芦荟单株茎段作为转化外植体，在MS培养基上预培养3～5d，以OD600为0.6～0.8的EHA105农杆菌工程菌液侵染25min，在MS+蔗糖10g／L+100μmo／L乙酰丁香酮的共体培养基上培养3d，在MS+6-BA3mg／L+Cef400mg／L+Kan50mg／L的筛选培养基上培养60d，然后转至MS+6-BA2mg／L+NAA0.15mg／L的分化培养基进行培养，生根后移栽。根据出苗的抗性茎段进行统计，转化率可达4.8％。利用PCR对转基因植株进行初步检测，然后利用Southern杂交进一步验证外源基因bFGF已经整合到芦荟的基因组中。
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标签：芦荟论文; 碱性成纤维细胞生长因子论文; 遗传转化论文;