黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达模式的研究

论文摘要

组蛋白乙酰化和去乙酰化可以改变染色质的结构,参与基因的表达调控和重编程。组蛋白乙酰基转移酶1（Histone acetyltransferases 1,HAT1）主要在细胞质内对合成的组蛋白进行乙酰化修饰,调控组蛋白的乙酰化水平。因此,研究卵母细胞成熟过程及早期胚胎发育过程中HAT1基因的表达模式,对深入了解动物个体的发生机理具有重要意义。本研究首先以本地黄牛GV期卵母细胞mRNA为材料,根据黄牛在GenBank上的序列设计目的基因HAT1和内参基因SDHA的特异性扩增引物,通过反转录聚合酶链式扩增（RT-PCR）获得特异性扩增条带,经克隆测序验证,成功获得目的基因片段。HAT1和SDHA引物的扩增效率分别为106%和97%,可以用2-△△Ct法对基因表达进行定量统计分析。然后,收集黄牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞,体外受精（IVF）和孤雌激活（PA）方法得到2～4细胞、8～16细胞、桑椹胚和囊胚等实验材料,进行HAT1的实时定量PCR分析。结果发现,HAT1基因在黄牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞、IVF胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为1.00、0.56、0.09、0.55、0.43和0.31,在PA胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为0.55、0.55、0.48和0.46。HAT1在GV期相对表达量最高,在IVF胚胎中2～4细胞表达量最少（P＜0.05）;在PA胚胎中,mRNA相对表达量相对稳定无明显波动。以上结果表明,早期胚胎HAT1基因的相对低表达可能与受精后的父源染色质重编程有关;PA胚胎HAT1基因的相对稳定表达可能与父源基因没有参与胚胎发育有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 组蛋白乙酰化及组蛋白乙酰基转移酶的研究进展
• 一、组蛋白乙酰化研究进展
• （一） 组蛋白研究概况
• （二） 组蛋白乙酰基转移酶（HATs）和去乙酰化酶（HDACs）
• （三） 组蛋白乙酰化作用
• 二、组蛋白乙酰基转移酶1（HAT1）综述
• （一） HAT1的鉴定
• （二） HAT1的生化特征
• （三） HAT1对新合成的H4的乙酰化调节作用
• （四） HAT1临床意义
• 三、本研究的目的和意义
• 第二章 黄牛HAT1基因的克隆和实时定量PCR检测方法的建立
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 结论
• 第三章 黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达的研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况