花鲈和军曹鱼部分细胞因子基因的克隆及表达特征研究

论文题目: 花鲈和军曹鱼部分细胞因子基因的克隆及表达特征研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 海洋生物学

作者: 邱丽华

导师: 宋林生

关键词: 花鲈,军曹鱼,细胞因子,白介素,肿瘤坏死因子

文献来源: 中国科学院研究生院（海洋研究所）

发表年度: 2005

论文摘要: 本论文以我国海水经济鱼花鲈 Lateolabrax japonicus 和军曹鱼(Acanthopagrusschlegeli) 为研究对象 采用同源克隆 快速扩增 cDNA 末端技术 Rapid amplificationof cDNA ends RACE 和半定量 RT-PCR 技术 对白介素 1a Interleukin 1a, IL-1a肿瘤坏死因子 á Tumor necrosis factor, á TNFá 和翻译肿瘤调控蛋白 Translationallycontrol tumor protein, TCTP 等基因进行克隆及表达特征研究 现将主要结果分述如下1 花鲈和军曹鱼 I L - 1 c D N A 的克隆与表达 花鲈 IL-1a cDNA全长 1310bp 包括一个 136bp 的 5’末端非编码区 untranslatedregion UTR 和一个 430bp 的 3’ UTR 其开放式读码框 open reading frame, ORF长 774bp 可编码 258 个氨基酸组成的白介素 1a 前体蛋白 预测分子量为 29.31kDa等电点为 5.64 军曹鱼 IL-1a 的 cDNA全长 1,104 bp 3ˊUTR 为 255 bp 5ˊUTR为 108 bp ORF 为 738bp 编码 246 个氨基酸 分子量大约为 27.68kDa 理论等电点为 5.71 同源性分析表明克隆的花鲈和军曹鱼 IL-1a cDNA序列与其它鱼类甚至哺乳动物的 IL-1a 基因具有很高的相似性 预测蛋白都包含有 1 个 IL-1a 家族的签名序列 signature 并与其它非哺乳类动物的 IL-1a 一样缺乏信号肽和白介素 1a转换酶 interleukin 1a converting enzyme ICE 切点 空间结构分析发现 花鲈和军曹鱼 IL-1a 与哺乳类 IL-1a 有相似的空间结构 即由 12 个 a 折叠片组成的三叶草结构 表明从花鲈和军曹鱼中克隆得到的 cDNA序列是 IL-1a 家族的成员 半定量RT-PCR 检测表明花鲈和军曹鱼 IL-1a 在大多数组织中均为组成型表达 LPS 或虹彩病毒 Iridovirus 刺激后 IL-1a 在部分组织中的表达水平可显著加强 说明 IL-1a存在组成型和诱导型两种表达机制 在花鲈和军曹鱼防御细菌或病毒的感染过程中发挥重要作用2. 花鲈 TNF cDNA 的克隆与表达 利用同源克隆和 RACE 技术克隆到花鲈 TNF cDNA 的全长序列 序列全长990 bp 3ˊUTR 为 192 bp 5ˊUTR 为 72 bp ORF 为 723 bp 可编码 241 个氨基酸 分子量大约为26kDa 同源性分析表明该序列与其它鱼类甚至哺乳动物的TNF 基因具有很高的相似性 并含有 TNF 家族的签名序列 signature 在氨基酸序 A<WP=5>邱丽华 花鲈和军曹鱼部分细胞因子基因的克隆及表达特征研究 博士学位论文列中发现一个潜在的跨膜区域 半定量 RT-PCR 检测发现 LPS 和虹彩病毒都可以诱导 TNF 基因高水平的表达 但是在不同组织内的表达存在差异 LPS 刺激后表达较强的组织是头肾和脾脏 而病毒感染后 TNF 在肝脏中的表达较强 结果表明花鲈 TNF 基因存在组成型和诱导型两种表达调控机制 在抵御病原感染过程中发挥重要作用3 花鲈 TCTP cDNA 的克隆与表达分析 利用同源克隆技术和锚定PCR技术从花鲈中克隆到 TCTP基因的全表达序列基因 cDNA全长 994bp 3ˊUTR 为 433 bp 5ˊUTR 为 47 bp ORF 为 510 bp可编码 170 个氨基酸 分子量大约为 19.253kDa 理论等电点为 4.55 序列分析可以看到 TCTP 家族的签名序列 一个 N-glycosylation 位点 和 5 个 Casein kinase IIphosphorylation 位点 同源性分析表明花鲈 TCTP 基因与斑马鱼等其他物种甚至哺乳类都有较高的相似性 利用 RT-PCR 技术 对 LPS 刺激下该基因在鱼体内的表达情况进行了初步研究 发现 TCTP 基因在鱼体的多种组织中都有表达但存在差异而经过 LPS 刺激后目的基因在组织中的表达明显增加 结果表明基因存在组成型和诱导型两种表达调控机制 同时说明基因在花鲈抵抗细菌入侵感染的免疫反应中起到一定的作用

论文目录:

中文摘要

ABSTRACT

第一章 文献综述

第一节 细胞因子

1.1.1 细胞因子的概念

1.1.2 细胞因子的分类

1.1.3 细胞因子的作用特点

1.1.4 细胞因子的生物学活性

1.1.5 低等动物部分细胞因子的研究进展

1.1.5.1 白介素 1 IL-1

1.1.5.2 肿瘤坏死因子 TNF

1.1.5.3 干扰素 IFN

第二节 TCTP 基因

1.2.1 TCTP 基因的命名

1.2.2 TCTP 基因的生物学作用

1.2.3 TCTP 基因的表达调控

1.2.4 鱼类 TCTP 基因的研究进展

第三节 研究目的

第二章 材料与方法

2.1 样本的采集与处理

2.1.1 花鲈

2.1.2 军曹鱼

2.2 RNA的提取

2.3 cDNA第一链的合成

2.4 基因片段克隆

2.5 基因片段的同源性分析

2.6 cDNA全序列的克隆及分析

第三章 实验结果

3.1 全序列的克隆及序列分析

3.1.1 花鲈白细胞介素 1

3.1.2 花鲈肿瘤坏死因子

3.1.3 花鲈翻译肿瘤调控蛋白

3.1.4 军曹鱼白细胞介素 1

3.2 克隆的全序列同源性分析

3.3 基因的表达特征分析

第四章 讨论

4.1 基因的结构特征

4.1.1 花鲈及军曹鱼白细胞介素

4.1.2 花鲈肿瘤坏死因子

4.1.3 花鲈翻译肿瘤调控蛋白

4.2 基因的表达特征

4.2.1 花鲈及军曹鱼白细胞介素

4.2.2 花鲈肿瘤坏死因子

4.2.3 花鲈翻译肿瘤调控蛋白

第五章 结论

参考文献

攻读博士学位期间的研究成果和发表论文

致谢

发布时间: 2005-04-18

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