论文摘要
目的:脑血管疾病以其高发病率、高病死率及高致残率,与心脏病、恶性肿瘤构成人类的三大致死原因。分析流行病学调查研究表明,脑卒中的危险因素可分为可干预性和不可干预性两类,可干预性危险因素是脑卒中一级预防的主要针对目标,包括高血压、心脏病、糖尿病、血脂异常、高同型半胱氨酸血症、吸烟、酗酒及肥胖等。不可干预危险因素包括年龄、性别、种族及遗传因素等。不同种族脑卒中发病率不同。有卒中家族史者较阴性家组史者更易患卒中。目前关于卒中的发病机制主要集中在分子遗传学方面。高血压是卒中最重要的危险因素,而肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin-system,RAS）在人体血压调节中起重要作用。本实验基于中国北方人的遗传背景,研究血管紧张素原（angiotensinogen,AGT）基因及肾素（rennin,REN）基因的单核苷酸多态性（single nucletide polymorphisms,SNPs）与中国人原发性高血压（essential hypertension,EH）及脑梗死（cerebral infarction,CI）的相关关系,进一步探讨脑梗死的发生机制。方法:⑴利用随机数字表从河北省流行病调查人群中选择82例人群对照,及78例原发性高血压患者,同时收集河北医科大学第二医院住院脑梗死患者82例。⑵调查并记录入选对象的一般情况（年龄、性别）、高血压史、糖尿病史及吸烟、饮酒史。同时检测并记录相应的生化指标值:空腹血糖、血浆总胆固醇、高密度脂蛋白、甘油三酯。⑶对入选对象抽取外周静脉血5ml,用经典的酚-氯仿抽提法提取基因组DNA。⑷参考以往文献,采用聚合酶链反应（ polymerase chain reaction, PCR）对兴趣片段进行扩增,经电泳证实PCR产物。⑸利用特异性内切酶对扩增片段进行切割,电泳观察酶切结果。即限制性片段长度多态性分析法（restriction fragment length polymorphism,RFLP）对入选对象进行AGT基因M235T（T704C）、T174M（C521T）、A-20C、G-6A及REN基因A10631G诸位点多态性检测。⑹随机选取部分标本进行测序以验证酶切结果。上海生工生物工程技术服务有限公司完成测序。⑺相关分析:计量资料以均数加减标准差表示（ x±s）,组间比较用u检验,计数资料组间比较用χ2检验。经多元Logistic回归分析校正其它有意义的脑血管病危险因素,分析基因多态性与脑梗死发生的相关关系。各项统计结果以P<0.05为有显著性差异。结果:⑴EH组与人群对照组比较:AGT基因M235T及T174M两多态性位点基因型及等位基因频率分布差异均有显著性。EH组235TT基因型及T等位基因频率分别为: 57.69%,76.28%,显著高于人群对照组（35.37%,48.78%,P<0.05）;而EH组174MT+MM基因型显著低于人群对照组（14.10%vs26.83% ,P<0.05）,M等位基因频率在EH组与人群对照组分别为7.05%,14.63%,差异有显著性。而AGT基因G-6A,A-20C两位点及REN基因A10631G位点基因型及等位基因频率多态性在两组间分布无差异。⑵CI组与人群对照组比较:AGT基因M235T及REN基因A10631G多态性位点分布有显著性差异。CI组235TT基因型（53.66%）及T等位基因（70.12%）频率显著高于人群对照组（P<0.05）;REN基因A10631G多态性位点在CI组AA型,AG型,GG型基因型频率分别为:29.27%,60.98%,9.76%,人群对照组分别为:13.41%,84.15%,2.40%,差异有显著性,而等位基因分布无显著性差异。AGT基因G-6A,A-20C及T174M位点基因型及等位基因频率多态性在两组间分布无差异。⑶CI组的两个亚组比较:高血压亚组及非高血压亚组中AGT基因M235T位点基因型及等位基因频率分布均无差异（P=0.591,P=0.898）。⑷将血浆总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,吸烟史及饮酒史等危险因素纳入进行Logistic回归分析,其中饮酒史是一种保护性因素,可减少脑梗死的发生（OR 0.43,P=0.0345）,余危险因素及AGT基因M235T多态位点及REN基因A10631G多态性位点未进入回归方程。结论:⑴AGT基因M235T及T174M多态性与EH的发生可能相关,235TT基因型及235T等位基因的存在可能增加EH的发生,而174MM基因型及174M等位基因的存在可能减少EH的发生。⑵AGT基因M235T及REN基因A10631G多态性可能与CI的发生相关,而且235M等位基因可能并不是通过升高血压而引起CI的。⑶AGT基因G-6A, A-20C两位点及REN基因A10631G位点多态性可能与EH的发生无相关性。⑷AGT基因G-6A,A-20C,T174M位点多态性可能与CI的发生无相关性。⑸适量饮酒可能减少CI的发生。