快中子辐射岷山红三叶愈伤组织再生体系的建立

论文摘要

论文通过对岷山红三叶（Trifolium pratense cv. Minshan）愈伤组织的辐射诱变和诱变后愈伤组织的细胞学观察及再生体系的建立。得到以下结论:1、通过配合使用酒精与次氯酸钠进行种子消毒发现:在不同次氯酸钠有效氯浓度和灭菌时间组合下,灭菌效果明显不同。有效氯浓度为2.0%,消毒时间为15min时消毒效果最佳,污染率控制在2.50%以内,浸种后对种子发芽率无显著影响。2、岷山红三叶种子在MS+20g/L蔗糖培养基上存在发芽率低,发芽时间不一致的问题。本试验发现培养基蔗糖浓度对种子发芽率和发芽势影响显著,当蔗糖浓度从20g/L降到0g/L时,发芽率从16%增加到47%,且发芽时间较为一致。3、以生长一周无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,获得愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2 mg/L 2,4-D +0.5 mg/L6-BA+2 %蔗糖+0.6 %琼脂,愈伤诱导率为100%。诱导出的愈伤用快中子进行辐射,辐射剂量对岷山红三叶的愈伤组织生长有明显的抑制作用。0.1032 Gy中子吸收剂量+0.1700Gy光子吸收剂量时有一半的愈伤死亡,为最佳的诱导愈伤变异的吸收剂量。辐射后的岷山红三叶愈伤出现了微核、小核、核出芽、双核、多核等细胞核畸变类型。辐射后的愈伤进行诱导分化,芽诱导最佳培养基为:B5+0.06 mg/L NAA+2%蔗糖+0.6 %琼脂,每瓶可以长出2～10个芽。最佳的生根培养基为:1/2 MS+0.05mg/LNAA +1.5%蔗糖+0.8%琼脂,生根率达到74%。5、采用压碎制片法和石蜡切片法观察红三叶愈伤组织内部结构表明,岷山红三叶的体细胞胚在愈伤组织内部和表面均有发生,胚性和非胚性愈伤在形态和细胞学上均有很大差别,体细胞胚的发生经历了多细胞原胚、球形胚、心形胚、子叶胚、鱼雷胚等多个阶段。在愈伤组织基部观察到了较体细胞长5～12倍的触角状特化细胞。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 前言
• 文献综述
• 1 植物组织培养理论基础
• 2 植物组织与细胞培养的历史回顾
• 3 三叶草属植物组织培养及育种的现状
• 4 体细胞胚细胞学研究进展
• 5 辐射育种
• 5.1 辐射诱变的机理
• 5.2 辐射诱变的研究现状
• 6 研究目的和意义
• 第一章 岷山红三叶无菌苗的获得
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 灭菌方法
• 1.3 污染率及发芽率的统计
• 2 试验设计
• 3 结果与分析
• 3.1 红三叶种子发芽率的影响因素
• 3.2 次氯酸钠对种子的灭菌效果
• 4 讨论与小结
• 第二章 岷山红三叶快中子辐射愈伤的植株再生
• 1 试验材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 激素
• 1.3 基本培养基
• 1.4 辐射方法
• 1.5 辐照样品中的吸收剂量计算方法
• 2 试验设计
• 2.1 愈伤组织诱导
• 2.2 愈伤组织的继代培养
• 2.3 愈伤组织的辐射
• 2.4 不定芽的分化
• 2.5 根的诱导
• 2.6 驯化和移栽
• 3 结果与分析
• 3.1 愈伤组织的诱导
• 3.2 愈伤组织的继代
• 3.3 辐射对愈伤组织的影响
• 3.4 不定芽的分化
• 3.5 根的诱导
• 3.6 再生植株的移栽
• 4 讨论与结论
• 4.1 讨论
• 4.2 结论
• 第三章 岷山红三叶愈伤组织的细胞学观察
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 胚性和非胚性愈伤组织的细胞学观察
• 2.2 辐射对愈伤细胞间期细胞核的影响
• 3 讨论与小结
• 第四章 讨论与结论
• 1 讨论
• 2 结论
• 图版I
• 图版II
• 参考文献
• 致谢
• 导师简介
• 指导教师简介
• 个人简介