红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞的保护作用

论文摘要

目的观察红景天苷（Salidroside）对低糖低血清损伤PC12细胞的保护作用。方法1、体外培养PC12细胞,采用低糖低血清培养基制备PC12细胞的低糖低血清损伤模型。通过MTT检测,观察低糖低血清损伤后不同时间（12h、24h、36h、48h）PC12细胞活力的变化。2、体外培养PC12细胞,给予不同浓度红景天苷（80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml）预保护24h,经低糖低血清损伤后24h,通过形态学分析和MTT检测,观察红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞形态和活力的影响。3、通过Hoechst33342染色和流式细胞仪分析,观察红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞凋亡的影响。4、通过RT-PCR和Western blot,观察红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达的影响。5、通过RT-PCR和Caspase3活性检测,观察红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞Caspase3 mRNA及其蛋白活性的影响。6、采用亲脂性阳离子荧光染料Rhodamine123标记PC12细胞,通过激光共聚焦显微镜检测低糖低血清刺激引起的PC12细胞线粒体跨膜电位的变化。同时观察红景天苷预保护对低糖低血清损伤PC12细胞线粒体跨膜电位的影响。7、利用分子探针DCFH-DA标记PC12细胞,通过流式细胞仪测定荧光产物DCF的荧光强度,观察红景天苷预保护对低糖低血清损伤PC12细胞内活性氧自由基（ROS）含量的影响。结果1、MTT结果显示,低糖低血清培养对PC12细胞有明显的细胞毒性作用,随着低糖低血清培养时间的延长,细胞活力逐渐下降。2、形态学观察及MTT检测结果显示,红景天苷能拮抗低糖低血清损伤PC12细胞活力下降,在所观察的剂量范围内,随着药物浓度的增加,作用逐步增强,至320μg/ml作用最显著（P<0.05）。3、Hoechst 33342染色和流式细胞仪检测结果显示,红景天苷能显著减少低糖低血清损伤PC12细胞的凋亡（P<0.05）。4、RT-PCR和Western blot结果提示,红景天苷能拮抗低糖低血清损伤所导致的PC12细胞Bcl-2/Bax mRNA及其蛋白比例的下降,此作用存在剂量效应关系,至320μg/ml作用最显著（P<0.05）。5、RT-PCR和Caspase3活性检测显示,红景天苷能拮抗低糖低血清损伤PC12细胞Caspase3 mRNA表达的上调和蛋白活性的增强,此作用存在剂量效应关系,至320μg/ml作用最显著（P<0.05）。6、线粒体跨膜电位检测结果显示,低糖低血清损伤后,PC12细胞线粒体跨膜电位明显下降,而红景天苷预保护能显著拮抗线粒体跨膜电位的下降（P<0.05）。7、活性氧自由基（ROS）检测结果显示,低糖低血清损伤后,PC12细胞内ROS含量明显上升,而红景天苷预保护能显著拮抗细胞内ROS含量的升高（P<0.05）,发挥清除ROS的作用。结论1、红景天苷能拮抗低糖低血清对PC12细胞的损伤作用,且这种作用呈现剂量相关性。2、红景天苷对低糖低血清损伤PC12细胞的保护作用与其调节凋亡相关基因、稳定线粒体跨膜电位和清除细胞内ROS有关。

论文目录

• 英文缩略词表（Abbrreviation）
• 中文摘要（Abstract in Chinese）
• 英文摘要（Abstract in English）
• 前言（Introduction）
• 材料与方法（Material and Method）
• 结果（Results）
• 讨论（Discussion）
• 结论（Conclusion）
• 参考文献（References）
• 综述（Review）
• 综述参考文献（References）
• 致谢（Acknowledgements）
• 已发表文章（Published Articles）