日本血吸虫童虫差异表达蛋白质组研究和童虫差异表达基因SjEnol的克隆和表达

论文摘要

日本血吸虫病（Schistosomiasis japonicum）是一种严重危害人类身体健康、影响经济和社会发展的人畜共患寄生虫病。不同发育阶段的血吸虫虫体在蛋白表达、生理生化特征等方面都存在一些差异。血吸虫童虫是血吸虫在终宿主体内发育的早期阶段,一些童虫差异表达蛋白可能对血吸虫生长发育至关重要。本研究应用蛋白质组学技术分析、研究血吸虫童虫差异表达蛋白,克隆和表达了血吸虫童虫差异表达蛋白烯醇酶SjEnol基因,为研制抗感染的分子疫苗、诊断抗原、新治疗药物提供基础。 本研究应用双向电泳技术对日本血吸虫（中国大陆株）童虫（16日龄）和成虫（雌、雄虫,40日龄）虫体可溶性蛋白进行了分离,应用image—master软件分析童虫、雌虫和雄虫的双向电泳图谱,显示两个不同发育时期虫体在可溶性蛋白组分上分别分离到2000±69、1100±75和1310±18个蛋白斑点,这些蛋白斑点大部分在Mr 10～80 KD、pI 3～8的电泳图谱区域,其中童虫蛋白电泳图谱中呈现26±2个不同于成虫的特异表达蛋白斑点。 从童虫期差异表达的蛋白斑点中选取10个对比性最强的蛋白斑点进行质谱鉴定,结果成功地获得了其中5个蛋白斑点的肽指纹图谱检测数据,进一步通过MASCOT、ProFound和Scope等软件查询数据库对目标蛋白进行鉴定。结果表明这些差异表达蛋白主要参与蛋白信号转导、能量代谢、转录、翻译调控和作为细胞构架蛋白等。 基于日本血吸虫期别差异表达蛋白质组的研究分析结果,选择一个童虫差异表达的蛋白分子进行深入研究,通过质谱（ESI）分析鉴定得到该蛋白质的部分氨基酸序列,利用RACE、PCR技术克隆出该目的蛋白编码基因,其ORF的核苷酸序列有1305bp,推测编码434个氨基酸,同源分析表明该蛋白为日本血吸虫烯醇酶（SjEnol）。构建了原核表达质粒pET28 a（+）

论文目录

• 第一部分 引言
• 第一章 血吸虫病
• 1.1 血吸虫生物学
• 1.1.1 血吸虫地位与种类
• 1.1.2 血吸虫的生活史
• 1.1.3 血吸虫的基因组
• 1.2 血吸虫病的流行、治疗及疫苗的研究进展
• 1.2.1 血吸虫病的分布及形势
• 1.2.2 血吸虫致病和治疗药物
• 1.2.3 抗血吸虫病疫苗的研究进展
• 第二章 血吸虫期别差异表达蛋白的研究
• 2.1 蛋白质组学
• 2.1.1 蛋白质组学的提出
• 2.1.2 蛋白质组学的意义
• 2.1.3 蛋白质组学技术
• 2.2 血吸虫蛋白质组的研究
• 2.2.1 血吸虫性别差异表达蛋白的研究
• 2.2.2 血吸虫期别差异表达蛋白的研究
• 第二部分 研究内容
• 第一章 日本血吸虫童虫差异表达蛋白质组的研究
• 1.实验材料
• 2.方法
• 3.结果与讨论
• 第二章 日本血吸虫童虫期差异表达蛋白烯醇酶编码基因的克隆、表达及功能分析
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 3.结果与讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 作者简历