一株小麦病原菌的鉴定及其生防菌剂的初步研究

论文摘要

查阅资料发现砖红镰刀菌的寄主范围广泛，可导致多种树木、小灌木、经济作物等产生萎蔫、顶枯和溃疡等症状，有时也可以侵染某些苗木，造成严重的经济损失。因此筛选具有高拮抗活性的生防菌并研发抗砖红镰刀菌的生防菌剂，对防治砖红镰刀菌引起的病害和保护生态环境具有重要意义。砖红镰刀菌虽然可侵染多种苗木、瓜果并造成较严重的损失，但其对于小麦的危害却鲜见报道。本文首先用分子生物学和传统形态学方法，对实验室保存的一株镰刀菌进行了种水平的鉴定，确定其为砖红镰刀菌。利用水培小麦和盆栽土培小麦研究了其对小麦的致病性。结果显示砖红镰刀菌在合适的条件下对郑麦9023、豫麦49具有致病力。为获得对砖红镰刀菌具有明显拮抗作用的生防菌，本文采用稀释涂布平板法从尚未发病的小麦、玉米田间土壤中分离得到104株供试菌，进一步采用平板对峙法从中初筛出5株对砖红镰刀菌具有明显拮抗作用的微生物，分别命名为BS-01、BS-02、BS-03、BS-KU、BS-HOT1；进一步复筛试验表明，菌株BS-02拮抗效果最佳。利用形态学、分子生物学和生理生化特性测定等鉴定方法将这5株拮抗菌鉴定为枯草芽孢杆菌。通过显微观察菌株BS-02对砖红镰刀菌菌丝生长的影响，证明菌株BS-02可通过分泌抗菌物质抑制砖红镰刀菌的生长。为提高生防菌的拮抗活性，本文以拮抗效果最佳的菌株BS-02为出发菌株，通过单因素试验和正交试验得到了其最佳拮抗活性的发酵条件：12h种龄，1%蔗糖、1%酵母膏、0.5%NaCl、初始pH5.0，5%接种量，装液量50mL/250mL，210r/min，31℃，48h。研究结果表明不同处理方式可对菌株BS-02的拮抗活性产生影响。0.22μm过滤除菌得到的菌株BS-02发酵原液的拮抗活性最高，115℃、30min处理得到的发酵液仍具有70%的拮抗活性。由此可知，菌株BS-02在上述最佳发酵条件下得到的经0.22μm过滤除菌的发酵原液对砖红镰刀菌具有最佳生防效果，可作为砖红镰刀菌的生防菌剂。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 砖红镰刀菌的培养性状
• 1.2 砖红镰刀菌的危害
• 1.3 砖红镰刀菌的生防现状
• 1.4 微生物在植物病害生物防治中的应用
• 1.4.1 植物内生菌
• 1.4.2 土壤有益微生物
• 1.4.3 微生物代谢产物
• 1.5 拮抗微生物的分离方法
• 1.5.1 植物内生菌的分离方法
• 1.5.2 土壤样品中拮抗微生物的分离方法
• 1.6 生防菌枯草芽孢杆菌的研究现状
• 1.7 枯草芽孢杆菌的抗菌物质及其分离纯化分析
• 1.8 研究目的和意义
• 1.9 主要研究内容和技术路线
• 第二章 一株镰刀菌的鉴定及其对小麦的致病性研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌种与培养基
• 2.1.2 供试小麦品种
• 2.1.3 供试镰刀菌分子生物学鉴定所需试剂
• 2.1.4 砖红镰刀菌对小麦致病性研究所需试剂
• 2.1.5 常用溶液的配制
• 2.1.6 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 一株镰刀菌菌种鉴定
• 2.2.2 砖红镰刀菌对小麦的致病性研究
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 一株镰刀菌菌种鉴定
• 2.3.2 砖红镰刀菌对小麦的致病性研究
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 第三章 砖红镰刀菌拮抗菌的筛选、鉴定及其拮抗机制的研究
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 菌种与培养基
• 3.1.2 拮抗菌分子生物学鉴定所需试剂
• 3.1.3 主要仪器设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 砖红镰刀菌拮抗菌的筛选
• 3.2.2 拮抗菌菌种鉴定
• 3.2.3 拮抗菌对砖红镰刀菌菌丝生长影响的显微观察
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 砖红镰刀菌拮抗菌的筛选
• 3.3.2 拮抗菌菌种鉴定
• 3.3.3 拮抗菌对砖红镰刀菌菌丝生长影响的显微观察
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 第四章 砖红镰刀菌生防菌剂的初步研究
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 供试菌株
• 4.1.2 培养基和耗材
• 4.1.3 菌株 BS-02 发酵条件优化所需试剂
• 4.1.4 发酵液有效生防成分的粗分离提取所需溶液
• 4.1.5 SDS-PAGE 所需溶液、试剂
• 4.1.6 主要仪器设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 挥发性物质的拮抗试验
• 4.2.2 拮抗菌单因素优化试验
• 4.2.3 拮抗菌正交试验
• 4.2.4 不同处理方式对发酵液拮抗活性的影响
• 4.2.5 缓冲液 pH 值对拮抗活性的影响
• 4.2.6 发酵液有效生防成分的粗分离提取
• 4.2.7 砖红镰刀菌生防菌剂的初步研究
• 4.2.8 SDS-PAGE 电泳试验
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 挥发性物质的拮抗试验
• 4.3.2 拮抗菌单因素优化试验
• 4.3.3 拮抗菌正交试验
• 4.3.4 不同处理方式对发酵液拮抗活性的影响试验
• 4.3.5 缓冲液 pH 值对拮抗活性的影响试验
• 4.3.6 砖红镰刀菌生防菌剂的初步研究
• 4.3.7 SDS-PAGE 电泳试验
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 个人简历