论文摘要
目的:为了更有效的促进种子细胞在韧带组织工程支架材料上的粘附增殖和从而合成和分泌细胞外基质,本实验在丝素(silk)薄膜上共价接枝人工合成的具有生物活性的GRGDS序列,然后在其表面种植体外培养的骨髓间充质干细胞,探索RGD多肽修饰的丝素蛋白支架材料对骨髓间充质干细胞的粘附、增殖的影响。方法:首先制备丝素蛋白薄膜材料,用交联剂EDC及NHS将RGD多肽共价接枝于丝素蛋白支架材料表面,X射线光电子能谱检测分析材料表面C、N、O元素分布及含量,评价接支修饰情况。以未接多肽的丝素蛋白材料和细胞培养板分别作阴性对照和阳性对照。取第三代MSC接种到材料和培养板上,在培养4h、12h后沉淀法定量检测粘附的细胞数检测细胞粘附率,培养1d、2d、3d、4d后比较材料上的细胞标准化细胞密度来反映细胞的增殖程度,培养24h后倒置相差显微镜下观察细胞粘附形态及铺展情况,对细胞骨架作免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察两组细胞骨架的组织情况。结果: XPS检测表明修饰前后材料表面C、N、O元素分布及含量明显不同。培养4h、12h时两时间点实验组细胞粘附率均显著高于阴性对照组,但与阳性对照组无明显差异,培养1d、2d、3d、4d时各组细胞的增殖程度无显著性差异; 24h时倒置相差显微镜下观察实验组细胞粘附形态及铺展情况较阴性对照组好,将两组细胞作免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜下观察发现实验组细胞的粘附数量,质量和细胞骨架的组织情况都较阴性对照组为好。结论:用交联剂EDC及NHS可成功将RGD多肽共价接枝于丝素蛋白支架材料表面。RGD多肽修饰对细胞增殖无明显促进作用,但能显著提高丝素蛋白支架材料对骨髓基质干细胞的粘附性,促进其在材料上的粘附和细胞骨架的组织。