认知障碍对大鼠炎症性疼痛的影响

论文摘要

目的:临床医学调查显示,痴呆病人对疼痛的感觉可能与常人不同。由于痴呆病人存在认知障碍,临床上难以对其程度进行量化和准确评估,这导致临床上忽视或没有正确的治疗痴呆病人的疼痛及相关病症,加重了痴呆病人的抑郁程度和睡眠紊乱,进一步使痴呆病人的病情加重,照顾者负担加重。本课题拟从基础研究的角度揭示认知障碍和疼痛之间存在的客观联系,为临床制定客观、完善、准确的反映痴呆病人疼痛的评估方法提供客观的依据和指导。方法:1.通过将Aβ1-40/1-42混合溶液（10μg/5μl）注入到双侧海马的CA1区来构造类似AD动物模型的大鼠认知障碍模型。2.应用行为学方法评价动物运动功能。3.利用Morris水迷宫筛选出认知存在障碍的动物。4.向筛选出的大鼠右侧胫跗关节注射50μl完全弗氏佐剂（CFA）以诱发炎症性疼痛模型,并进行热刺激痛阈值和机械刺激痛觉阈值的测定。5.为进一步验证认知障碍（老年性痴呆）与疼痛之间的关系,本研究先采用CFA佐剂注射到大鼠的右侧胫跗关节以诱发炎症性疼痛动物模型。6.将放线菌酮（一种蛋白合成阻断剂）注入大鼠双侧海马的CA1区来干扰CFA对大鼠已经造成的疼痛记忆。7.利用Morris水迷宫对动物的记忆水平进行评估。同时,对经过相同手术处理的另两组动物进行热刺激痛阈值和机械刺激痛觉阈值的测定。8.检测海马及腰椎脊髓中Aβ、胆碱乙酰转移酶ChaT、N -甲基- D -天冬氨酸受体NMDAR1、蛋白激酶PKCγ的表达:通过免疫组织化学方法检测各组大鼠海马及脊髓中Aβ、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表达情况。9.检测海马、丘脑、基底神经节、杏仁核和腰椎脊髓中Aβ、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表达:通过Western Blot方法检测各组大鼠海马、丘脑、基底神经节、杏仁核和腰椎脊髓中Aβ、ChaT、NMDAR1、PKCγ的表达情况。结果:1.在整个试验过程中,所有经历过手术的动物都能正常行走并拥有健康的步态。2.在Morris水迷宫实验中,AD模型组动物的逃避潜伏期明显比Na?ve组、ACSF组长。3.注射过CFA的大鼠右足和未注射CFA的相比,其热痛阈值和机械痛觉阈值明显减小,但AD/CFA组和AD/Veh组之间、ACSF/CFA组和AD/CFA组之间具有显著性差异。4. Morris水迷宫结果表明放线菌酮组动物的逃避潜伏期明显比生理盐水组动物的长。5.放线菌酮组与生理盐水组相比,放线菌酮组动物的热痛阈值和机械痛觉阈值明显增加。6.免疫组织化学结果:AD模型组动物海马中检测出Aβ沉积明显增多,而Na?ve组和ACSF组动物的海马中几乎检测不到Aβ的沉积。AD模型组动物的海马中ChaT的表达和其他组动物的相比,明显减少。全部CFA佐剂组与Na?ve组、vehcile组相比,CFA佐剂注射组动物的海马及腰椎脊髓中NMDAR1的表达明显增加。AD/CFA组和ACSF/CFA组相比,前组动物NMDAR1的表达量略有减少。全部CFA佐剂注射组动物的海马中PKCγ的表达与对照组相比显著增加,ACSF/CFA组动物的海马中PKCγ的表达与AD/CFA组相比增加更为显著。7.Western Blot结果:Aβ在AD模型组动物中的表达与Na?ve、ACSF两组相比,Western Blot的结果和免疫组织化学的结果基本保持一致。与Na?ve、全部ACSF组相比,ChaT在全部AD模型组动物的对侧、同侧海马、丘脑、基底神经节、杏仁核的表达都出现明显的下调。NMDAR1在ACSF/CFA、AD/CFA两组动物的对侧、同侧海马、丘脑、基底神经节、杏仁核的表达与在它们各自相应的对照组相比,其表达量明显上调。但是,NMDAR1在AD/CFA组的表达与ACSF/CFA组相比,表达量略有减少。PKCγ在ACSF/CFA、AD/CFA两组动物的对侧、同侧海马、丘脑、基底神经节、杏仁核的表达与它们各自的对照组相比较,其表达量显著增加。但是,PKCγ在AD/CFA组的表达明显少于ACSF/CFA组。结论:1.认知障碍与大鼠疼痛反应存在紧密的关联,认知障碍的动物对疼痛的热刺激与机械刺激较不敏感。2.放线菌酮注射造模,能明显干扰动物的空间记忆巩固过程,此种认知存在缺损的动物对疼痛的热刺激和机械刺激与对照组动物相比,痛觉表现不明显。3.本研究的结果提示,存在认知障碍的动物在炎症性疼痛的刺激下,可引起大鼠对侧海马,丘脑,基底神经节,杏仁核和同侧脊髓的Aβ、NMDA受体和PKCγ表达显著上调; ChaT表达明显下调。本研究可为痴呆病人的疼痛治疗提供客观的依据和支持。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 序言
• 第一章 从行为学的角度探索认知障碍在炎症性疼痛中的作用
• 第一节 海马注射AΒ1-40/1-42 混合物建立AD 动物模型
• 1 老年性痴呆模型的建立
• 1.1 主要仪器及试剂
• 1.1.1 仪器
• 1.1.2 试剂
• 1.2 试验动物
• 1.3 Aβ1-40/1-42 的制备
• 1.4 AD 模型动物的建立
• 1.5 运动功能评价
• 1.5.1 评价方法
• 1.5.2 评价结果与分析
• 1.6 Morris 水迷宫试验
• 1.6.1 Morris 水迷宫试验设计
• 1.6.2 Morris 水迷宫试验结果与分析
• 2 炎症性疼痛模型的建立
• 2.1 主要仪器及试剂
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 试剂
• 2.2. CFA 注射诱发炎症性疼痛
• 2.3 行为学测定
• 2.3.1 行为学测定方法
• 2.3.2 行为学测定结果与分析
• 第二节 海马注射放线菌酮（一种蛋白合成阻断剂）模拟认知缺损的大鼠模型
• 1 动物模型的建立
• 1.1 主要仪器及试剂
• 1.1.1 仪器
• 1.1.2 试剂
• 1.2 药品的准备
• 1.3 试验设计
• 2 MORRIS 水迷宫试验
• 2.1. Morris 水迷宫方法
• 2.2. Morris 水迷宫结果与分析
• 3 行为学测定
• 3.1 行为学测定方法
• 3.2 行为学测定结果与分析
• 第二章 生化指标的检测
• 1 免疫组织化学
• 1.1 免疫组织化学方法及检测指标
• 1.2 免疫组织化学结果与分析
• 1.2.1 Beta-amyloid（Aβ）在海马中表达的变化
• 1.2.2 ChaT 在海马中表达的变化
• 1.2.3 NMDAR1 在海马、腰椎脊髓中表达的变化
• 1.2.4 PKCγ在海马中表达的变化
• 2 WESTERN BLOT
• 2.1. Western Blot 方法及检测指标
• 2.2. Western Blot 结果与分析
• 2.2.1 Beta-amyloid（Aβ）在海马中的表达
• 2.2.2 ChaT 在海马、丘脑、基底神经节和杏仁核中的表达
• 2.2.3 NMDAR1 在海马、丘脑、基底神经节、杏仁核和腰椎脊髓中的表达
• 2.2.4 PKCγ在海马、丘脑、基底神经节、杏仁核和腰椎脊髓中的表达
• 第三章 结论
• 第一节 研究成果及意义
• 第二节 对今后研究的思考和展望
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的文章
• 致谢