2，3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞

论文摘要

背景与目的:2,3-吲哚醌（isatin,ISA）是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:采用荧光染色、流式细胞术（flow cytometry,FCM）及Western blot等方法检测不同浓度ISA（0、100、200、400μmol/L）诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制。结果:ISA（0、100、200、400μmol/L）作用SH-SY5Y细胞48 h后,在荧光显微镜下观察到400μmol/L ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:细胞核出现固缩、DNA断裂。Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降。100、200、400μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48 h,活化caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组（10.58%）（P＜0.05）。Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂（inhibitor of caspase-activated dnase,ICAD）被降解。细胞周期分析表明,经100、200、400μmol/L ISA处理48h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及CyclinD1（CDK1）蛋白表达显著减少（P＜0.05）。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 实验材料
• 1.1 细胞株及培养体系
• 1.2 药品与试剂
• 1.3 材料与仪器
• 第二章 实验方法
• 2.1 细胞株及培养体系
• 2.2 MTT法检测ISA对正常人成纤维细胞增殖活性的影响
• 50)'>2.3 MTT法测定ISA作用于SH-SY5Y细胞的半数抑制量(IC₅₀)
• 2.4 Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡的形态学改变
• 2.5 Hochest33258/PI荧光染色检测细胞凋亡的形态学改变
• 2.6 Western blot检测Bcl-2,Bax蛋白表达
• 2.7 活化的Caspase-3及其底物的检测
• 2.8 PI染色流式细胞仪（FCM）分析细胞周期
• 2.9 Western blot分析磷酸化的ERK,cyclinD1（CDK1）蛋白变化
• 2.10 统计学分析方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 ISA对人正常成纤维细胞增殖活性的影响
• （50）值'>3.2 ISA作用SH-SY5Y细胞的半数抑制量(IC_（50）值
• 3.3 ISA处理后细胞形态学变化
• 3.4 Hochest33258/PI荧光染色检测细胞凋亡
• 3.5 ISA处理后细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达水平的变化
• 3.6 ISA处理后细胞中活化的Caspase-3及其底物的表达
• 3.7 不同浓度ISA对SH-SY5Y细胞周期的影响
• 3.8 ISA处理后细胞中磷酸化的ERK,cyclinD1（CDK1）的表达水平
• 3.9 附图
• 第四章 讨论
• 2,3-吲哚鲲的结构、性质及其抗肿瘤作用的现状
• 2,3-吲哚鲲的体外抗肿瘤活性及机制
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述的参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢