厚壳贻贝脂溶性提取物的制备和抗关节炎效果及其作用机理研究

论文摘要

类风湿关节炎是一种以多关节受累为主要表现的慢性自身免疫性炎症疾病,具有较高的发病率和致残率,是造成人群劳动力丧失的主要疾病之一。研究已经证实新西兰翡翠贻贝冷冻干燥粉和脂溶性提取物具有较强的抗关节炎效果,现己作为一种天然的抗关节炎营养增补剂广泛应用于类风湿关节炎及骨关节炎的预防和治疗。本文以我国舟山嵊泗产的厚壳贻贝为研究对象,分别对厚壳贻贝的营养价值、厚壳贻贝脂溶性提取物的C02超临界萃取工艺、厚壳贻贝冷冻干燥粉和厚壳贻贝脂溶性提取物的急慢性抗炎效果、以及厚壳贻贝脂溶性提取物及其与消炎痛联用的抗关节炎效果和机理进行了系统研究,其结果如下：1.厚壳贻贝具有很高的营养价值：在蛋白质方面,富含人体所有的必需氨基酸,且牛磺酸的含量较高；在矿物质方面,富含各种常量元素和微量元素,其中Zn和Se的含量较高；在脂肪酸方面,富含n-3多不饱和脂肪酸,其中EPA和DHA的总含量高达31.8%。2.厚壳贻贝脂溶性提取物的超临界C02流体萃取最佳工艺条件为：萃取压力35 MPa,萃取温度49℃,C02流量28 kg/h,萃取时间130 min,此时的萃取率为5.65%。3.厚壳贻贝冷冻干燥粉和脂溶性提取物对二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀没有抑制作用,对冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性也没有影响,而对角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀也只表现出较弱的抑制作用,表明其对急性炎症几乎没有抗炎效果。4.厚壳贻贝冷冻干燥粉和脂溶性提取物对肉芽肿大鼠的肉芽组织增生以及佐剂性关节炎大鼠的足跖肿胀均有显著的抑制作用,且抑制作用呈现剂量-效应关系,表明其对慢性炎症具有较强的抗炎效果；相同剂量下,厚壳贻贝脂溶性提取物的慢性抗炎效果和新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物相当。5.厚壳贻贝脂溶性提取物具有较强的抗关节炎效果,在100 mg/kg的剂量下,能显著抑制佐剂性关节炎大鼠和II型胶原性关节炎大鼠的足跖肿胀,降低其关节炎指数,改善其踝关节的病理症状,同时还能防止大鼠因关节炎导致的体重增长缓慢以及脾脏肿大现象。相同剂量下,厚壳贻贝脂溶性提取物的抗关节炎效果和新西兰翡翠贻贝脂溶性提取物相当。6.厚壳贻贝脂溶性提取物与消炎痛联用能显著提高其对佐剂性关节炎大鼠和II型胶原性关节炎大鼠的抗炎效果,同时还能减弱消炎痛对内源性前列腺素E2 （PGE2）和血栓素B2 （TXB2）的抑制作用,从而减轻消炎痛对消化道系统的损伤作用,使大鼠的体重增长趋于正常。7.厚壳贻贝脂溶性提取物抗关节炎的机理：（1）降低关节炎大鼠血清中花生四烯酸经脂氧化酶（5-LOX）和环氧合酶（COX-2）途径的代谢产物（炎症介质）—白三烯B4（LTB4）、PGE2以及TXB2的产生,从而抑制关节炎的发生和发展。（2）降低关节炎大鼠血清和踝关节腔液中促炎细胞因子—白介素-1p（IL-1p）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）的生成,同时促进抗炎细胞因子—白介素-4（IL-4）和白介素-10（IL-10）的产生,从而抑制关节炎的异常免疫反应过程。（3）下调II型胶原性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中基质金属蛋白酶（MMP1、MMP13）的InRNA表达,同时上调基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP1）的1nRNA表达,使MMPs/TIMPs平衡向TIMPs转移,从而抑制MMPs对关节软骨的降解和破坏。（4）下调II型胶原性关节炎大鼠踝关节滑膜组织中酪氨酸激酶MAPKs信号通路相关信号分子一p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外信号调节激酶1（ERK1）细胞外信号调节激酶2（ERK2）和c-Jun氨基末端激酶3（JNK3）的mRNA表达,从而抑制由MAPKs信号通路介导的炎症介质、促炎细胞因子以及MMPs的产生,以达到抗关节炎效果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 绪论
• 1.1 贻贝概况、营养价值及生物活性研究进展
• 1.1.1 贻贝概况
• 1.1.2 贻贝的营养价值
• 1.1.3 贻贝的生物活性研究进展
• 1.2 非甾体类抗炎药物的抗炎活性及安全性研究进展
• 1.2.1 非甾体抗炎药物的抗炎活性
• 1.2.2 非甾体抗炎药物引起的不良反应
• 1.3 贻贝的抗炎活性及作用机理研究
• 1.3.1 贻贝抗炎活性研究的由来
• 1.3.2 贻贝抗关节炎活性的研究进展
• 1.3.3 贻贝抗炎作用机理研究
• 1.4 细胞因子与类风湿关节炎
• 1.4.1 促炎细胞因子和类风湿关节炎
• 1.4.2 抗炎细胞因子与类风湿关节炎
• 1.5 基质金属蛋白酶（MMPs）和类风湿关节炎
• 1.5.1 MMPs分类
• 1.5.2 MMPs的功能
• 1.5.3 MMPs的调控
• 1.5.4 参与类风湿关节炎致病的MMPs
• 1.5.5 MMPs参与RA关节软骨及骨破坏的机制
• 1.5.6 以MMPs为靶点治疗RA的策略
• 1.6 酪氨酸蛋白激酶MAPKs信号通路与类风湿关节炎
• 1.6.1 MAPKs信号通路的生物学特征
• 1.6.2 MAPKs信号通路与RA
• 1.7 本课题的研究背景、研究目的和研究内容
• 1.7.1 研究背景
• 1.7.2 研究目的
• 1.7.3 研究内容
• 第2章 厚壳贻贝与紫贻贝、翡翠贻贝的营养成分比较分析
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要设备与试剂
• 2.2.3 实验方法
• 2.2.4 统计学分析
• 2.3 结果分析与讨论
• 2.3.1 厚壳贻贝与紫贻贝、翡翠贻贝的一般营养成分比较分析
• 2.3.2 厚壳贻贝与紫贻贝、翡翠贻贝的氨基酸组成比较分析
• 2.3.3 厚壳贻贝与紫贻贝、翡翠贻贝的矿物元素含量比较分析
• 2.3.4 厚壳贻贝与紫贻贝、翡翠贻贝的脂肪酸含量比较分析
• 2.4 本章小结
• 第3章 厚壳贻贝脂溶性提取物的超临界萃取工艺研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 主要设备与试剂
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果分析与讨论
• 3.3.1 影响厚壳贻贝脂溶性成分萃取效果的单因素试验
• 3.3.2 响应面法优化超临界CO2萃取工艺条件
• 3.4 本章小结
• 第4章 厚壳贻贝抗炎效果研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 主要设备与试剂
• 4.2.3 实验方法
• 4.2.4 统计学分析
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 TMDP和TMLE对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响
• 4.3.2 TMDP和TMLE对冰醋酸诱导小鼠腹腔渗出性炎症的影响
• 4.3.3 TMDP和TMLE对角叉菜胶诱导大鼠足跖肿胀模型的影响
• 4.3.4 TMDP和TMLE对棉球诱导大鼠慢性肉芽肿的影响
• 4.3.5 TMDP和TMLE对佐剂性关节炎大鼠足跖肿胀的影响
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 第5章 厚壳贻贝脂溶性提取物抗关节炎效果及作用机理研究
• 5.1 引言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 主要设备与试剂
• 5.2.3 实验方法
• 5.2.4 统计学分析
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 TMLE以及与消炎痛联用对佐剂性关节炎大鼠的抗炎效果
• 5.3.2 TMLE以及与消炎痛联用对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的抗炎效果
• 5.3.3 TMLE以及与消炎痛联用对佐剂性关节炎大鼠的抗炎机理
• 5.3.4 TMLE以及与消炎痛联用对Ⅱ型胶原性关节炎大鼠的抗炎机理
• 5.4 讨论
• 5.4.1 模型的建立与评价
• 5.4.2 TMLE以及与消炎痛联用对关节炎大鼠的抗炎效果
• 5.4.3 TMLE以及与消炎痛联用对关节炎大鼠的抗炎机理
• 5.5 本章小结
• 第6章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 1.个人简介
• 2.博士期间发表的论文
• 3.博士期间的发明专利