鸡肝散提取物在大鼠体内的药代动力学研究

论文摘要

鸡肝散（Elsholtzia blanda benth）又称四棱蒿、白香薷或四方蒿等,为唇形科香薷属多年生草本植物,产于云南西南部至东南部温热地区、贵州东南部、广西的西部及四川等地。资源十分丰富,其叶、花或全草均可入药。其药性味苦辛、凉,具有清热解毒、止血镇痛等功效,哈尼族民间将其用于治疗眼疾病及呼吸道感染,其疗效甚佳。现今研究表明其具有治疗肾炎、肝炎、痢疾、急性胃肠炎、牙痛、创伤出血等症。除此之外还具有抗胸痹症等抗心血管疾病的功效。鸡肝散化学成分复杂多样,提取分离后,根据理化性质和光谱分析,确定这些化合物为木犀草素,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷,5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮和5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮等。鸡肝散提取物中黄酮类化合物的药理活性显著,已有较多文献报道,但是对于提取物中黄酮类化合物吸收、分布、代谢和排泄的研究,即药物ADME过程则未见报道。药物ADME揭示了机体对药物的处置规律,以及这些处置对药物疗效和毒性的影响,因此研究鸡肝散的体内药代动力学具有重要的临床意义。目的建立RP-HPLC法测定大鼠生物样品中鸡肝散药效成分——木犀草素的含量,定量测定木犀草素在大鼠体内的药-时曲线,组织分布以及排泄率,同时定性检测大鼠血浆、尿、胆汁及粪便中的代谢物的情况,研究鸡肝散提取物在SD大鼠中的药代动力学行为,了解其ADME的情况。方法1)吸收:①取24只雄性SD大鼠,每个时间点4只,采用HPLC法测定给药后0.17、0.5、1、2、4、6 h时,SD大鼠血浆、胃肠道组织中游离木犀草素和总的木犀草素的含量,以获得胃肠道对于木犀草素苷及苷元的吸收情况。②取12只SD大鼠,雌雄各半,灌胃给予鸡肝散提取物后,于0.17、0.33、0.5、0.67、0.83、1、2、3、4、5、6、7、8 h由尾静脉取血,血浆样品经酸水解、三氯乙酸沉淀蛋白、乙酸乙酯提取处理后,用RP-HPLC法测定血药浓度,获得药-时曲线及药动学参数。2)分布:取24只雄性SD大鼠,每个时间点4只,测定给药后0.17、0.5、1、2、4、6 h时,SD大鼠各组织中水解后木犀草素的含量,确定这些组织中的分布情况。3)代谢:取6只雄性SD大鼠,给药后,其中3只大鼠收集4～6 h尿样及0～24 h粪样,另外3只收集2～4 h胆汁样品,运用UPLC-MS、UPLC-MS/MS和UPLC-PDA这三种手段,确定鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷在大鼠体内的代谢产物,分析其代谢途径。4)排泄:取10只雄性SD大鼠,给药后,于不同时间段采集尿样、粪便及胆汁,经处理后,以木犀草素为目标物,分别测定其在不同时间段尿样、粪便及胆汁中的浓度,确定木犀草素在大鼠体内的排泄率及排泄途径。结果1)吸收:①鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷在肠道中迅速水解成木犀草素而被吸收,在胃肠道组织中主要以苷元木犀草素形式存在。②木犀草素在SD大鼠体内的药动学行为符合开放二室模型,木犀草素在给药后1h处达到峰值。经大鼠性别和测定时间两因素方差分析,提示不同性别大鼠的血药浓度间的差别具有统计学意义。2)分布:木犀草素经吸收后快速分布至各组织,其中代谢比较旺盛的肝、肾组织中木犀草素的含量较心、肺组织中高;肾、心、肺这三个组织中的木犀草素含量均为1 h时达最大,这与血药浓度达峰时间相似;而在肝组织中,药物分布迅速,0.17 h已达高峰;在其它组织中因检测灵敏度问题而未被检出。3)代谢:大鼠尿液中所检测到的代谢物主要为木犀草素单葡醛酸结合物、甲基化的木犀草素单葡醛酸结合物、甲基化的木犀草素硫酸结合物、木犀草素硫酸结合物、甲基化的木犀草素以及木犀草素。在胆汁中,代谢物则主要为木犀草素硫酸结合物、甲基化的木犀草素单葡醛酸结合物以及木犀草素的葡醛酸硫酸结合物。在粪便中,则只检测到了木犀草素。上述代谢物均为木犀草素苷元的二相代谢物,在所有组织,血液中均未检测到原形药物木犀草素苷。由此,判断鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷主要是经胃肠道水解以后,以苷元木犀草素形式吸收入大鼠体内,二相代谢是木犀草素在大鼠体内的主要代谢途径。4)排泄:木犀草素以二相结合物的形式由肾经尿排出体外,而胆汁中的二相结合物排入肠道后,在肠道菌群的水解作用下,形成木犀草素,最后通过粪便排出体外。总累积排泄率为37.6%,其中尿中为11.1%,粪便中为26.5%。结论建立的生物样本中木犀草素含量测定方法具有灵敏、准确、专属性强等特点,可用于鸡肝散药效成分木犀草素的体内药动学研究。药动学研究表明鸡肝散提取物中主要成份木犀草素苷在肠道内先水解成木犀草素,随后迅速吸收、分布至主要组织,二相结合反应是其主要代谢途径,药物主要经粪便排出体外。以上研究结果有助于鸡肝散提取物的临床合理应用和进一步深入研究。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 目次
• 1 绪论
• 2 鸡肝散提取物大鼠胃肠道的吸收以及大鼠体内的药动学研究
• 2.1 鸡肝散提取物在大鼠胃肠道的吸收研究
• 2.2 鸡肝散提取物在大鼠体内的药动学研究
• 3 鸡肝散提取物在大鼠体内的组织分布研究
• 3.1 实验方法
• 3.2 实验结果
• 3.3 讨论
• 4 鸡肝散提取物在大鼠体内的代谢研究
• 4.1 实验方法
• 4.2 实验结果
• 4.3 讨论
• 5 鸡肝散提取物在大鼠体内的排泄研究
• 5.1 实验方法
• 5.2 实验结果
• 5.3 讨论
• 6 结论
• 参考文献
• 作者简历