低温胁迫下柑橘正反向差减cDNA文库的构建及生物信息学分析

论文摘要

柑橘属于一种亚热带经济果木,是世界上种植面积最为广‘泛的果树之一。然而,柑橘的种植却经常性地遭受低温伤害,每年经济损失巨大并随着全球气候变化多端呈现上升趋势。而枳,作为柑橘属近缘植物,在经历冷驯化后能够耐受-20℃的低温侵袭。研究柑橘不同品种抗寒性能的差异和探讨低温驯化的分子机制已成为柑橘抗逆领域的研究热点,尤其是在常规育种方法不足以显著改变植株耐寒性的情况下。近期,柑橘基因组测序的成功完成将极大地促进柑橘的基因及抗逆分子机制的研究。因此获取更多低温胁迫下的柑橘的基因和生物学信息,对柑橘分子抗寒机理的研究和今后的生产实践具有深远的意义。在实验室前期柑橘研究的基础上,本研究以枳为实验材料,对其进行模拟自然条件下入冬时期温度变化处理,利用抑制性消减杂交技术构建枳低温胁迫下正向及反向cDNA文库,获取特异表达的EST序列,生物信息学分析预测其同源序列基因的功能,并对EST序列的功能进行分类注释和功能比对分析。对获得BLAST比对结果的35条ESTs分析结果表明,枳的低温驯化过程中差异表达基因功能涉及到代谢、防御、信号传导、表达调控、光合作用、蛋白合成各方面,成功获取了一些具有潜在价值的EST序列。本研究一方面进一步完善了抑制性差减杂交技术在柑橘研究中的应用；另一方面,获取了柑橘低温胁迫下正反向文库的基因信息,为柑橘抗寒特异基因和低温驯化分子机理的深入研究提供借鉴和参考。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 植物响应低温胁迫研究现状
• 1.1 低温胁迫下植物的生理生化研究
• 1.2 低温胁迫的信号转导机制研究
• 1.3 低温胁迫的转录调控机理研究
• 1.4 低温胁迫的蛋白质组学研究
• 2 差减cDNA文库与SSH技术
• 2.1 差减cDNA文库
• 2.2 SSH技术
• 第二章 低温胁迫下枳正反向差减cDNA文库的构建
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料及处理
• 2.2 主要仪器与耗材
• 2.3 主要试剂、药品及配制方法
• 2.4 实验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 总RNA的抽提与质量检测
• 3.2 mRNA分离纯化结果
• 3.3 cDNA的合成及其RsaⅠ酶切结果
• 3.4 Tester接头连接效率分析
• 3.5 差减效率检测
• 3.6 阳性克隆检测
• 4 讨论
• 第三章 差减cDNA文库EST的获取及生物信息学分析
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 生物信息学分析软件及数据库
• 2.3 实验方法
• 3 结果与分析
• 3.1 测序结果统计分析
• 3.2 EST序列功能比对
• 3.3 EST序列预测功能的分类注释和分析
• 4 讨论
• 第四章 结论与创新
• 1 结论
• 2 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介