论文摘要
春石斛兰作为兰花产业中的一个重要的兰花种类,主要靠扦插和高压方法进行繁殖,其繁殖系低、繁殖周期长。近年来春石斛兰在国外市场销量很大,而在国内作为盆花观赏则刚刚崭露头角,市场上较好的春石斛兰品种大多引自引进日本,这限制了我国春石斛兰的深入研究与发展。本研究以从日本引进的23个品种春石斛兰为材料,围绕春石斛兰组培的增殖,对侧芽外植体的建立、不同激素对部分品种增殖的影响和组培苗的继代培养等几个关键技术进行了研究,同时对春石斛兰、密花石斛和建兰‘小桃红’×纹瓣兰的试管开花进行了研究,试验结果如下:1.对春石斛兰的最佳消毒方案和光照条件进行了研究,初步确定了3个代表品种（004、022和052）春石斛兰的最佳消毒方案,即芽尖外留一层叶鞘,75%酒精消毒15 s和0.1% HgCl2消毒8 min;春石斛兰侧芽外植体的暗培养具有减轻春石斛兰褐化的作用。2.在相同培养条件下,对日本引进的23个春石斛兰品种进行了启动率、增殖率和增殖系数等方面的研究。结果表明,23个春石斛兰品种间的差异显著,在483个接种的外植体中,51.97%的外植体在诱导培养基中不适宜工厂化繁殖。依据平均增殖系数,以1.0和2.0为标准将23个品种分为高、中和低3个组;6-BA浓度梯度试验得出,适宜3个代表品种（022、021和026）增殖的6-BA浓度分别为3.39、2.07和1.92 mg/L,该浓度满足组内大多品种的组培增殖要求。1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+卡拉胶7.0 g/L+蔗糖20 g/L+椰子乳100 ml/L+细菌学蛋白胨2.0g/L适合001、002、004和022这4个品种的侧芽组培增殖。3. 12个春石斛兰品种侧芽增殖系数与3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ的浓度间均存在抛物线关系,对12个品种侧芽平均增殖系数的影响顺序为:KT>6-BA>TDZ。在1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+卡拉胶7.0 g/L+蔗糖20 g/L+椰子乳100 ml/L+细菌学蛋白胨2.0g/L基础上,添加3.0 mg/L 6-BA适合004品种的侧芽增殖,添加2.0 mg/L KT适合005和035这2个品种的侧芽增殖,添加3.0 mg/L KT适合015、019和026这3个品种的侧芽增殖。4.生长素对D.Tubuyaki和D.Shirasagi的增殖率影响显著,6-BA与6-BA×KT对D.Tubuyaki和D.Shirasagi的增殖率和增殖系数影响均显著。0.5mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT适合D.Tubuyaki的侧芽增殖;适合D.Shirasagi侧芽增殖的激素组合为0.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT。5. 5个春石斛兰品种侧芽组培苗的继代培养条件存在差异性。1/2 MS +卡拉胶7.0 g/L+蔗糖20g/L+椰子乳100 ml/L+细菌学蛋白胨2.0g/L+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L适合002、004和022的继代培养;通过调整基本培养基配方可改善D.Casiflake和D.Emur侧芽组培苗继代培养时的褐化和生长状况,在上述培养基上添加0.03%活性炭可以有效防止D.Casiflake和D.Emur继代培养褐化。6.初步建立了兰花试管开花的诱导方案,即在蔗糖40g/L+卡拉胶6g/L+4.0 mg/L 6-BA的基础上,附加低氮高磷和变温。密花石斛无菌播种苗在变温（18℃±1/25±1）下,MS1（1/3 N,9 P）处理中有2株诱导出1个花芽（6.6%）,开放畸形的白花;MS4（1/6 N,15 P）处理中有1植株诱导出2个花芽（3.3%）,开放正常的黄花。但对建兰杂交种（XTW）无菌播种苗和D.Spot Right侧芽组培苗的离体花芽没有诱导效果。7.研究了植物材料的成熟程度对兰花离体花芽诱导作用。选取成熟的兰花植株,进行细胞分裂素（6-BA、TDZ）浓度处理,可诱导出花蕾。在1/2MS+蔗糖40g/L+卡拉胶8g/L+活性炭1.0g/L上,附加6-BA 1.0 mg/L+TDZ 0.1mg/L诱导建兰杂交种（XTW）无菌播种苗1株产生花蕾（3.3%）;附加6-BA 10 mg/L+TDZ 1.0 mg/L诱导建兰杂交种（XTW）无菌播种苗2株出现花蕾（6.7%）;附加6-BA 5.0 mg/L诱导春石斛兰（D.Spot Right）侧芽组培苗6株出现花蕾（20%）。