HIF-1a与VEGF在小脑血管网织细胞瘤中的表达

论文摘要

血管网织细胞瘤,也叫血管母细胞瘤（Hemangioblastoma, HB）,是一种起源于中胚叶残余组织,发生在中枢神经系统的肿瘤,约占颅内肿瘤的0.9%～2.1%,为良性肿瘤,一般不具有侵袭性。小脑、脊髓、脑干是其好发部位,病变位于小脑者约占95%,它常散在或伴随VHL疾病发生。目前,手术切除是治疗的主要方法。小脑HB主要由血管组成,血供非常丰富,增加了手术的风险和死亡率,而且位置靠近脑干和第四脑室,尤其是肿瘤的部位位于手术禁区时,就不能采取手术的方法,亟待一种新的治疗方法。因为小脑HB相比于其它脑肿瘤最突出的特征就是高度血管化,所以针对小脑HB的发生和发展过程中肿瘤血管的新生的治疗成为一种理想的治疗方法。缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α）是近年来发现的在体内缺氧条件下发挥主要调控作用的一种转录因子,在多种肿瘤细胞中均有表达。目前,已知体内促进血管新生最重要的因子为血管内皮细胞生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）,它能够直接刺激内皮细胞分裂增殖,是高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,参与许多生理及病理过程,可促进血管内皮细胞增生、迁移及增加血管通透性。近年来对HIF-1α和VEGF在肿瘤的发生和发展中的作用成为研究的热点,并且研究证明HIF-1α能够促进VEGF等基因的表达,使肿瘤血管出现增生改变,在肿瘤血管新生的过程中起核心调控作用。目的:本文通过免疫组化法和RT-PCR法对小脑HB组织中HIF-1α与VEGF基因蛋白及mRNA水平表达的检测,探索HIF-1α与VEGF在小脑HB中的表达及相关性,为小脑HB发生和发展的分子机制研究提供实验数据。方法:1病例资料采集:收集2001年至2006年间,河北医科大学第二医院神经外科手术切除,且病历资料保存完好的小脑HB组织石蜡包埋标本30例,且所有患者临床资料完整,所有患者术前均未经过放、化疗。另取我院神经外科10例后颅窝减压术患者的正常小脑组织作为对照。新鲜冷冻标本5例,均来自2005年至2006年我院神经外科手术过程中所取的小脑HB组织,并及时经液氮冷冻后保存于-80℃冰柜,并取1例行后颅窝减压术患者正常小脑组织冷冻保存作为对照。2免疫组织化学染色法检测小脑HB组织中HIF-1α与VEGF在蛋白水平的表达:免疫组化步骤按试剂盒说明进行操作。判定标准:光学显微镜下观察10个高倍镜（10×40倍）视野阳性细胞所占比例,计算阳性细胞率。无阳性细胞或阳性细胞数<1%为阴性（-）,阳性细胞数1%～10%为阳性（+）,11%～50%为中度阳性（++）,>50%为强阳性（+++）。3 RT-PCR法检测小脑HB组织中HIF-1α与VEGF mRNA水平的表达:从冻存的正常小脑组织和小脑HB标本中,用TRIzol法提取细胞总RNA,经RT-PCR反应,并分别对HIF-1α与VEGF目的基因片段进行扩增后,经1.5%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察后用LabWork系统对各条带进行扫描测定光密度值,对所得半定量数据进行统计分析。4统计学分析:分类数据变量资料的比较采用Fisher确切概率法,相关分析采用Spearman等级相关分析。0.4≤r<0.7表示中度相关,r≥0.7表示高度相关。计量资料用均数±标准差（x±S）表示。结果:1 HIF-1α蛋白在小脑HB组织中的表达情况:正常人小脑组织标本仅见1例HIF-1α阳性表达,小脑HB中28例HIF-1α阳性表达,HIF-1α在小脑HB和正常小脑中表达的阳性的率为93.3%和10%,两者差异具有统计学意义（P<0.01）。2 VEGF蛋白在小脑HB组织中的表达情况:正常人小脑组织仅见1例VEGF阳性表达,小脑HB中29例VEGF阳性表达,VEGF在小脑HB和正常小脑中表达的阳性率为96.6%和10%,两者差异具有统计学意义（P<0.01）。3 HIF-1αmRNA在小脑HB组织中的表达情况:正常人小脑组织未见HIF-1αmRNA表达,所有的小脑HB组织中都检测到HIF-1αmRNA表达。在小脑HB和正常小脑组织中表达的阳性率为100%和0%。4 VEGF mRNA在小脑HB组织中的表达情况:正常人小脑组织未见VEGF mRNA表达,所有的小脑HB组织中都检测到VEGF mRNA表达。在小脑HB和正常小脑组织中表达的阳性率为100%和0%。5小脑HB中HIF-1α与VEGF在蛋白水平的表达是正相关（r=0.903）。结论:1小脑HB中HIF-1α蛋白和HIF-1αmRNA表达都明显增高。2小脑HB中VEGF蛋白和VEGF mRNA表达都明显增高。3小脑HB中HIF-1α与VEGF的表达具有相关性。HIF-1α可能通过促进VEGF的表达,在小脑HB的发生和发展过程中发挥重要作用。4 HIF-1α与VEGF有望成为小脑HB治疗中很有意义的治疗目标或预后指标。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 HIF-1α与VEGF 在小脑血管网织细胞瘤中的表达
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 小脑血管网织细胞瘤中HIF-1α及 VEGF 表达的研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历