芽孢杆菌MC67发酵条件优化及对猕猴桃细菌性叶枯病防治效果初探

论文摘要

芽孢杆菌MC6是由西北大学生科院408实验室从猕猴桃根际土壤中分离筛选得到的,该菌株对猕猴桃叶枯病病原菌有良好的拮抗性能。本文在此研究的基础上,对菌株MC6进行了分类鉴定、He-Ne激光诱变、发酵条件优化、无菌发酵液稳定性测定和盆栽防效等初步研究,主要研究结果如下：通过细胞形态学观察、生理生化检测以及16SrDNA序列分析方法对菌株MC6进行了分类鉴定,初步确定菌株MC6是一株巨大芽孢杆菌；通过对猕猴桃叶枯病菌拮抗性能测定,发现菌株MC6对病原菌的抑菌圈直径平均可达12.8mm；采用输出功率为10mw的He-Ne激光照射具有拮抗能力的MC6菌株15mmin后,以猕猴桃叶枯病病原菌作为指示菌,从拮抗正突变株中筛选出拮抗能力显著提高的MC67,比MC6菌株抑菌效果提高了26.61%,经传代培养,突变株MC67遗传性状稳定。综合考虑突变株MC67生长量A660和抑菌率两个指标,从15种不同的培养基单因素条件下选择了最佳培养基配方和最佳碳氮源。在此基础上,通过均匀设计与正交试验相结合优化出最佳发酵工艺条件组合即：培养时间30h,培养温度350C,摇床转数150rprn,培养pH值7.0,接菌量0.5%。研究发现突变株MC67发酵滤液不仅可以很好的抑制猕猴桃叶枯病菌的生长繁殖,而且大大降低病原菌的致病性,对猕猴桃叶枯病具有很好的预防和治疗效果；同时诱发了植株体内某种防御机制,能够提高猕猴桃体内植物保护酶SOD酶活性和POD酶活性。对突变株MC67发酵滤液抑菌效果的稳定性进行了研究,结果表明其发酵滤液具有酸沉淀、热稳定性、耐受高压、抗蛋白酶K和紫外线、水溶性及醇溶性等特点。初步推断突变株MC67发酵滤液抗菌物质活性成分为脂肽类物质。室内盆栽试验结果表明：突变株MC67发酵液对猕猴桃叶枯病防治效果显著。接种猕猴桃叶枯病病原菌前0h,24h和48h以20mL/盆浇灌MC67发酵液,7天后各处理组防效分别为76.4%,87.3%,96.6%,接种病原菌20天后防效分别为38.5%,55.9%,81.0%,单接突变株MC67发酵液的植株未见发病,生长良好。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 猕猴桃叶枯病害研究进展
• 1.1 猕猴桃简介
• 1.2 陕西省猕猴桃产业现状
• 1.3 猕猴桃细菌性叶枯病的研究史
• 1.4 猕猴桃细菌性叶枯病害的防治现状
• 2 芽孢杆菌作为生防菌的研究现状
• 2.1 芽孢杆菌概况
• 2.2 芽孢杆菌的生防机理研究
• 3 激光诱变育种研究进展
• 3.1 激光生物学作用原理
• 3.2 He-Ne激光生物学作用原理
• 3.3 He-Ne激光诱变的研究和应用
• 第二章 叶枯病拮抗细菌MC6的种属鉴定
• 引言
• 1 试验材料
• 1.1 菌株
• 1.2 培养基与试剂
• 1.3 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 拮抗细菌MC6形态鉴定
• 2.2 拮抗细菌MC6生理生化鉴定
• 2.3 拮抗细菌16SrDNA序列分析
• 2.4 拮抗细菌MC6拮抗性能研究
• 3 结果与分析
• 3.1 形态鉴定结果
• 3.2 生理生化鉴定结果
• 3.3 16SrDNA序列分析结果
• 3.4 拮抗细菌MC6拮抗性能测定
• 4 结论与讨论
• 第三章 He-Ne激光诱变提高拮抗细菌MC6的拮抗能力
• 引言
• 1 试验材料
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 诱变用菌种活化
• 2.2 He-Ne激光照射MC6菌体条件
• 2.3 诱变菌拮抗能力检测试验
• 2.4 诱变菌发酵液拮抗能力检测试验
• 2.5 筛选突变株遗传稳定性检测试验
• 3 结果与分析
• 3.1 确定He-Ne激光诱变MC6菌体的最佳剂量
• 3.2 拮抗正突变株的筛选结果
• 3.3 突变株MC67发酵液的拮抗能力试验
• 3.4 突变株MC67的遗传稳定性试验
• 4 结论与讨论
• 第四章 突变株MC67发酵条件的优化
• 引言
• 1 试验材料
• 1.1 菌种
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 2 试验方法
• 2.1 不同培养基对突变株MC67抑菌效果的影响
• 2.2 不同碳源对突变株MC67抑菌效果的影响
• 2.3 不同氮源对突变株MC67抑菌效果的影响
• 2.4 不同发酵条件对突变株MC67抑菌效果的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 培养基对突变株MC67抑菌效果的影响
• 3.2 碳源对突变株MC67抑菌效果的影响
• 3.3 氮源对突变株MC67抑菌效果的影响
• 3.4 发酵条件对突变株MC67抑菌效果的影响
• 4 结论与讨论
• 第五章 突变株MC67发酵滤液拮抗效果稳定性及盆栽防效研究
• 引言
• 1 试验材料
• 1.1 菌株
• 1.2 培养基
• 1.3 主要仪器
• 1.4 室内盆栽概况
• 2 试验方法
• 2.1 突变株MC67发酵滤液作用机理初探
• 2.2 测定突变株MC67发酵滤液的稳定性
• 2.3 室内盆栽防效测定
• 3 结果与分析
• 3.1 突变株MC67发酵滤液的作用机理初探
• 3.2 突变株MC67发酵滤液的稳定性测定
• 3.3 突变株MC67发酵液防治猕猴桃叶枯病菌的盆栽防效测定
• 4 结论与讨论
• 结论、创新点以及讨论
• 1 结论
• 2 创新点
• 3 讨论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的科研成果
• 致谢