准分子激光术后角膜神经损伤与修复研究

论文摘要

第一部分LASIK与epi-LASIK术后角膜神经损伤与修复实验研究目的探讨准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis，LASIK）与机械法准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（epipolis laser in situ keratomileusis，epi-LASIK）术后角膜神经形态学变化和功能修复。方法健康新西兰白兔20只，其中2只做为正常对照，其余18只做为实验组。实验组白兔，随机选择一眼行LASIK，另一眼行epi-LASIK。两种手术的激光切削方案相同：光学区直径6mm，切削深度81μm（-5.0Ds）。分别在术后1天、3天、7天、1月、3月、6月，取3只兔子的角膜行氯化金染色，观察角膜神经形态。分别在术前、术后3天、7天、1月、3月、6月，采用Cochet-Bonnet敏感度测量仪测量中央角膜知觉。结果Epi-LASIK术后，切削区内浅层角膜神经消失，深层基质神经保留。LASIK术后，除蒂部以外，角膜瓣内角膜神经均消失，切削区内深层基质神经也大部分消失。Epi-LASIK术后1天，出现少量再生神经纤维；术后3天、7天，出现大量再生神经纤维，并形成上皮下神经丛及上皮间神经末梢。LASIK术后3天，角膜瓣边缘出现少量再生神经纤维，中止于瓣基质中；术后7天，角膜瓣边缘再生神经纤维稍增多，但仍中止于瓣基质中，未见上皮下神经丛及上皮间神经末梢形成。Epi-LASIK术后，切削区中央上皮间神经末梢恢复至正常需1～3个月，LASIK术后需6个月。Epi-LASIK术后，切削区内前基质神经丛形成速度较快，但早期形态异常，术后6月时，前基质神经丛形态接近正常。LASIK术后，角膜瓣内前基质神经丛形成速度较慢，但形态更接近正常，术后6月时前基质神经丛基本恢复。LASIK术后角膜知觉下降严重，甚至消失，恢复至正常需6个月。Epi-LASIK术后角膜知觉下降程度轻，恢复至正常需3个月。术后各时间点，除6月以外，LASIK组角膜知觉均较epi-LASIK组更低，差异均有统计学意义（t=16.11，18.50，16.92，5.20；P＜0.01）。结论形态学与功能学的变化均提示，LASIK对角膜神经的损伤程度较epi-LASIK更重，角膜神经修复速度也更慢。第二部分LASIK与epi-LASIK术后角膜中神经生长因子变化实验研究目的探讨LASIK与epi-LASIK术后兔角膜中神经生长因子（nerve growth factor，NGF）变化。方法健康新西兰白兔28只，其中4只做为正常对照，其余24只做为实验组。实验组白兔，随机选择一眼行LASIK，另一眼行epi-LASIK。两种手术的激光切削方案相同：光学区直径6mm，切削深度81μm（-5.0Ds）。分别在术后1天、3天、7天、1月，取角膜中央6mm区域，用于NGF免疫组化染色、Western blot检测NGF蛋白表达、RT-PCR半定量法检测角膜上皮与基质NGFmRNA表达。结果正常兔角膜中，NGF免疫阳性染色弱。Epi-LASIK术后1天，角膜上皮层NGF免疫阳性染色明显增多；术后3天，角膜上皮完全愈合，NGF免疫阳性染色仍较正常时稍多；术后7天、1月，角膜中NGF免疫阳性染色弱，与正常角膜接近。LASIK术后各时间点，角膜NGF免疫阳性染色弱，与正常角膜接近。Western blot结果示，Epi-LASIK术后各时间点，角膜NGF蛋白表达与正常角膜接近（P＞0.05）。LASIK术后1天、3天，角膜NGF蛋白表达较正常对照少，差异有统计学意义（t=-12.52，-9.95；P=0.001）；术后7天、1月，角膜NGF蛋白表达与正常对照接近（P＞0.05）。两种手术之间比较，术后1天、3天，LASIK组角膜NGF蛋白表达较epi-LASIK组少，差异有统计学意义（t=-6.50，-5.85；P=0.023，0.028）。RT-PCR结果示，epi-LASIK术后1天、3天，角膜上皮NGFmRNA表达较正常对照多，1天时最明显，差异有统计学意义（t=9.88，3.96；P=0.001，0.021）。LASIK术后各时间点，角膜上皮NGFmRNA表达与正常对照接近（P＞0.05）。两种手术之间比较，术后1天、3天，epi-LASIK组角膜上皮NGFmRNA表达较LASIK组多，差异有统计学意义（t=6.86，6.82；P=0.021，0.021）。epi-LASIK术后1天，角膜基质NGFmRNA表达较正常对照多，差异有统计学意义（t=5.25，P=0.006）。LASIK术后各时间点，角膜基质NGFmRNA表达与正常接近（P＞0.05）。两种手术之间比较，术后1天，epi-LASIK组角膜基质NGFmRNA表达较LASIK组多，差异有统计学意义（t=26.1，P=0.001）。结论epi-LASIK术后早期角膜上皮NGFmRNA及其蛋白表达增高，可能与角膜神经再生以及角膜知觉的维持有关。LASIK术后早期角膜中NGF蛋白表达下降，可能是角膜神经大范围受损所致，与术后早期角膜知觉严重下降以及角膜神经修复缓慢可能有关。第三部分LASIK和LASEK术后角膜知觉恢复临床研究目的比较LASIK和乙醇法准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术（laser-assisted subepithelial keratectomy，LASEK）后角膜知觉的恢复情况。方法行LASIK或LASEK近视矫正的患者59人，包括低、中度近视行LASEK20人，高度近视行LASEK30人，以及低、中度近视行LASIK9人。分别在术前、术后2周、1个月、3个月和6个月时测量中央角膜知觉，并和切削深度进行相关性检验。结果LASIK和LASEK术后角膜知觉均下降，但LASIK术后下降更明显。在各时间点，LASEK术后的角膜知觉均好于LASIK，差异均有统计学意义（术后2周、1个月、3个月时，P＜0.01；6个月时P=0.031）。低、中度近视LASIK术后6个月时角膜知觉仍未恢复（P=0.023）；而LASEK术后3个月时角膜知觉已恢复（P＞0.05）。高度近视LASEK术后6个月时角膜知觉基本恢复（P＞0.05）。LASEK术后1、3及6个月的角膜知觉和切削深度有相关性（r=-0.419，-0.433，-0.413；P＜0.05），其余时间点两者无相关性。LASIK术后各时间点的角膜知觉和切削深度无相关性（P＞0.05）。结论 LASEK术后角膜知觉下降程度较LASIK术后轻，LASEK术后角膜知觉恢复较LASIK术后快，LASEK术后角膜知觉恢复与切削深度有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 LASIK与epi-LASIK术后角膜神经损伤与修复实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 图版
• 第二部分 LASIK与epi-LASIK术后角膜中神经生长因子变化实验研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 图版
• 第三部分LASIK与LASEK术后角膜知觉恢复临床研究
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文参考文献
• 综述（含参考文献）
• 致谢
• 附录