论文摘要
目的:探讨AdA-FOS对体外培养的卵巢癌细胞3AO/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制,为临床逆转卵巢癌多药耐药性提供新的治疗靶点和实验依据。 方法:本研究将含有突变型AdA—fos基因的质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细菌,选取特异引物PCR扩增阳性的克隆进行检测鉴定,将检测确认的大肠杆菌克隆进行摇菌、质粒抽提并纯化、定量,命名为PCDNA3.1/AdA—fos。以Fugene6类脂质体转基因试剂介导将PCDNA3.1/AdA—fos转染体外培养的卵巢癌耐药细胞株3AO/DDP作为实验组,转染空载体PCDNA3.1的卵巢癌耐药细胞株3AO/DDP及单纯的3AO/DDP细胞株分别作为空载体对照组及空白对照组。RT-PCR及DNA琼脂糖凝胶电泳法分析外源基因的表达;将以上各组细胞分别加入DDP,倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳法对细胞凋亡情况进行检测;抗单链DNA（ssDNA）单克隆抗体（mAb）免疫组织化学法检测转染AdA—fos后DDP对3AO/DDP细胞凋亡的诱导作用,并根据凋亡率判断AdA—fos转染对3AO/DDP细胞耐药的逆转作用。 结果:应用Fugene6类脂质体将真核表达载体PCDNA3.1/AdA—fos成功地转染3AO/DDP细胞。经RT-PCR及DNA琼脂糖凝胶电泳分析证实AdA-fos转染后在3AO/DDP细胞中有AdA—fos基因表达;在DDP的作用下,耐药卵巢癌细胞3AO/DDP增殖活性明显受到抑制;耐药细胞出现包括凋亡小体、梯形电泳条带等典型的凋亡征象,凋亡率为45.71%,明显高于对照组,P<0.005,有统计学意义。
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