硼替佐米诱导骨髓瘤细胞未折迭蛋白反应及凋亡

论文摘要

背景和目的:蛋白酶体抑制剂（proteasome inhibitor, PI）作为一类新型抗肿瘤药物,自2003年被美国FDA批准用于治疗复发难治性多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）以来,取得了令人瞩目的临床疗效,但对其作用机制仍不是十分清楚。深入研究PI触发MM细胞凋亡的信号转导通路,既有利于理解PI的药效机理,又有利于为更有效的联合治疗方案的制订及新作用靶点药物的研制提供新的思路。一直认为,PI的抗肿瘤机制通过干扰NF-κB信号来实现,而最近发现NF-κB抑制剂诱发MM细胞凋亡的程度却远不及PI显著,强烈提示PI诱导MM细胞凋亡极可能存在其它的途径。鉴于内质网应激诱发的细胞反应即未折迭蛋白反应（unfolded protein response, UPR）在多种分泌性肿瘤细胞尤其是MM细胞的凋亡中起重要作用,故本课题采用蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导MM细胞NCI-H929 （H929）和RPMI8226 （8226）凋亡为模型,以XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达为UPR指标,探讨PI对MM细胞未折迭蛋白反应及凋亡的影响。方法和结果:以不同方式处理细胞后,采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染联合流式细胞术检测靶细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western blot检测靶细胞XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达;用慢病毒转染介导的RNA干涉沉默XBP-1基因,观察靶细胞相应改变。结果表明:（1）采用不同浓度硼替佐米分别处理H929和8226细胞24小时后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈剂量依赖性的增加; （2） H929和8226细胞分别经硼替佐米处理不同时间后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈时间依赖性增加; （3） H929和8226细胞分别经标准内质网应激剂Brefeldin A处理不同时间后,靶细胞凋亡率及靶细胞中XBP-1s、XBP-1u、BiP、CHOP mRNA和蛋白的表达均呈时间依赖性增加,其变化趋势与硼替佐米处理组基本一致,该结果进一步支持硼替佐米诱发的MM细胞的凋亡涉及UPR;（4）硼替佐米能抑制Brefeldin A诱导的XBP-1s、XBP-1u、BiP mRNA和蛋白的表达,促进Brefeldin A诱导的CHOP mRNA和蛋白的表达,提示硼替佐米可以减弱Brefeldin A所诱导的UPR保护成分的表达,增强其诱导的UPR促凋亡成分的表达;（5）沉默XBP-1基因后,靶细胞对硼替佐米的敏感性增加,提示XBP-1在内质网应激的状态下,对细胞起保护作用。结论:1.硼替佐米能够呈时间、剂量依赖性诱导MM细胞凋亡;2.硼替佐米诱发MM细胞凋亡涉及UPR;3.硼替佐米虽然通过抑制内质网相关性蛋白降解（ER-associated protein degration ERAD）诱发内质网应激,但却干扰UPR中保护成分的表达;4. UPR的关键成分XBP-1在内质网应激的状态下,对MM细胞的生存起保护作用。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 1. 实验材料
• 2. 试验方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历及研究成果
• 致谢