茯茶“金花”菌提取物药理功效与化学成分的初步研究

论文摘要

随着世界经济的飞速发展,在不断提高人们生活水平的同时,也使全球的环境发生变化,进而影响人类健康,不断有各种疾病困扰人们。因此,寻找天然、高效、安全的药物已成为科研人员十分关注的课题。茶为药食两用植物,研究发现其具有降血脂、抗肿瘤、抗病毒等诸多药理功能。茯茶是黑茶中极具特色的一种,“发花”是形成茯茶独特品质的关键工序,其实质是通过控制一定的外界条件,促使微生物优势菌——冠突散囊菌（Eurotium cristatum）在茶叶上生长繁殖,产生金黄色闭囊壳,即俗称的“金花”,随着茯茶降血脂等保健功能研究的逐步深入,“金花”菌也日益受到人们的关注。本研究以茯茶中的“金花”菌为研究对象,采用现代提取分离技术对其孢子粉进行提取分离,并运用细胞水平药物筛选手段对分离的组分进行活性筛选,以期找到具有药理活性的部分,为茯茶及“金花”菌的深度开发提供理论依据。本研究的主要结果如下：1、茯茶中“金花”孢子粉提取条件的确立与提取物残留检测通过采用不同浓度的乙醇和水对“金花”孢子粉进行提取,以孢子破壁情况和提取率为评价指标,确定“金花”孢子粉的最佳提取条件为：采用70%乙醇对孢子粉进行充分研磨并超声提取30 min。此时的“金花”孢子破壁较好,且提取率达到11.77%。将各提取物采用顶空气相色谱检测法测定其中试剂残留,结果发现“金花”孢予粉提取物三氯甲烷层（Ⅱ）、乙酸乙酯层（Ⅲ）和水层（Ⅳ）中,Ⅱ号样未检出三氯甲烷残留；Ⅲ号样乙酸乙酯残留量为0.0040%,三氯甲烷未检出；Ⅳ样乙酸乙酯残留量为0.0039%,三氯甲烷未检出。都符合《中国药典》的要求,为进一步的药理试验排除了试剂干扰。2、茯茶中“金花”孢子粉提取物降脂功能的筛选采用细胞水平药物筛选方法,将人正常肝细胞L02体外诱导培养成非酒精性脂肪肝细胞,以“金花”孢子粉提取物作为药试样对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞进行给药试验。发现“金花”孢子粉提取物水层部分（Ⅳ）在试药24 h和48 h时,都能降低非酒精性脂肪肝细胞内TG的含量,且与阳性药物辛伐他汀和血脂康的效果相当。同时Ⅳ还能降低非酒精性脂肪肝细胞ALT、AST泄露量,说明“金花”孢子粉提取物Ⅳ部分能修复肝细胞膜损伤,并具有降脂功效。3、茯茶中“金花”孢子粉提取物抗肿瘤功能的筛选选用人胃癌细胞（SNU 719-2）、人乳腺癌细胞（MCF-7）和人肝癌细胞（HepG2）分别对茯茶中“金花“孢子粉提取物进行细胞水平的抗肿瘤药物筛选,探讨茯茶中“金花”菌的抗癌活性。试验发现“金花”孢子粉提取物氯仿层（Ⅱ）对该三种人体肿瘤细胞的增殖都具有一定的抑制作用,且在25-200μg/mL浓度范围内呈现剂量依赖关系；当浓度为200μg/mL时,胃癌细胞（SNU 719-2）和人肝癌细胞（HepG2）的存活率仅为58.16%和49.17%,接近或己达到了IC50。说明“金花”孢子粉提取物Ⅱ部分具有较好的抗肿瘤效果。4、茯茶中“金花”孢子粉内含成分的检测分析对黑毛茶,黑毛茶发花散茶,“金花”菌孢子粉及其菌丝体中的主要化学成分进行检测分析,发现黑毛茶在发花后氨基酸总量、多酚总量、可溶性蛋白质、黄酮总量都有所下降,但可溶性糖总量和多糖含量却呈较大幅度提高。这说明在茯茶加工过程中,通过物化动力和生化动力的作用,使黑毛茶内含成分发生急剧化学变化,从而为茯茶独特品质风味的形成提供物质基础。同时检测发现“金花”孢子粉提取物Ⅱ和Ⅳ中黄酮总量和多酚总量含量较高,从已有的研究推断茯茶中“金花”孢子粉的主要功能应与黄酮和多酚类物质有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1 国内外研究进展
• 1.1 茯砖茶优势菌的分离与鉴定
• 1.2 冠突散囊菌的形态特征
• 1.3 "金花"菌生长条件研究
• 1.3.1 茯砖茶中"金花"菌的生长条件
• 1.3.2 冠突散囊菌液态发酵培养条件
• 1.4 "金花"菌与茯砖茶品质形成的研究
• 1.5 冠突散囊菌胞外多糖的提取和分离纯化研究
• 1.6 "金花"菌安全性研究
• 1.7 "金花"菌保健方面研究
• 2 研究目的和意义
• 3 主要研究内容
• 第二章 "金花"菌孢子粉提取分离及提取物溶剂残留检测
• 1 材料与方法
• 1.1 主要材料
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 实验方法
• 1.4.1 散茶发花
• 1.4.2 "金花"孢子粉提取条件的探索
• 1.4.3 "金花"孢子粉提取物的制备
• 1.4.4 残留检测气相色谱条件
• 1.4.5 残留检测气相顶空条件
• 2 结果
• 2.1 "金花"孢子粉提取条件的确立
• 2.2 "金花"孢子粉提取物的溶剂残留检测
• 3 讨论
• 第三章 "金花"菌孢子粉提取物对体外诱导培养的非酒精性脂肪肝细胞的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 主要材料
• 1.2 主要设备
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 "金花"孢子粉的提取物制备
• 1.3.2 细胞培养及非酒精性脂肪肝细胞模型的建立
• 1.3.3 各提取物组分作用浓度的选择
• 1.3.4 各提取组分对非酒精性脂肪肝细胞的影响
• 1.3.5 统计学分析
• 2 结果
• 2.1 非酒精性脂肪肝细胞模型建立条件的确定
• 2.2 "金花"孢子粉提取物作用非酒精性脂肪肝细胞浓度的确定
• 2.3 "金花"孢子粉提取物对非酒精性脂肪肝细胞TG含量的影响
• 2.4 "金花"孢子粉提取物对非酒精性脂肪肝细胞ALT、AST泄漏量的影响
• 3 讨论
• 第四章 "金花"菌孢子粉提取物对体外培养的三种人体肿瘤细胞增殖的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 细胞株
• 1.2 主要材料
• 1.3 主要设备
• 1.4 方法
• 1.4.1 "金花"孢子粉的提取物制备
• 1.4.2 细胞培养
• 1.4.3 MTT比色法测定提取物对各肿瘤细胞增殖的影响
• 1.4.4 统计学分析
• 2 结果
• 2.1 MTT法检测"金花"孢子粉提取物对人胃癌细胞（SNU 719-2）增殖的影响
• 2.2 MTT法检测"金花"孢子粉提取物对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖的影响
• 2）增值的影响'>2.3 MTT法检测"金花"孢子粉提取物对人肝癌细胞（HepG₂）增值的影响
• 3 讨论
• 第五章 "金花"菌化学成分分析
• 1 材料与方法
• 1.1 供试样品
• 1.2 主要仪器
• 1.3 主要药品
• 1.4 生化成分检测方法
• 2 结果与分析
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介