生防内生细菌EBS05的研究

论文摘要

EBS05是一株从樟树（Cinamonum camphora）中分离的内生细菌,对多种植物病原菌真菌和烟草花叶病毒具有较强的拮抗活性,且具有耐酸碱、耐盐、耐高温、抗生作用稳定等作为生防因子的优良特性。为了进一步研究和挖掘EBS05的生防潜力,本文对EBS05的定殖动态、发酵条件、防治效果以及和适乐时的联合毒力进行了研究,为该菌株的进一步研究和开发提供理论依据。1、以樟树内生细菌EBS05为出发菌株,采用逐步提高培养基中抗生素浓度和紫外诱变的方法,获得了抗120μg/mL链霉素和5μg/mL利福平,且遗传性状和拮抗活性稳定的突变菌株;以抗链霉素和利福平突变株为筛选标记菌株,采用稀释平板法,研究了内生细菌EBS05在小麦体内的定殖动态。结果表明,EBS05在小麦根内具有较强的定殖能力,且能从根部向茎、叶部转移,其定殖量与菌株的接种浓度呈正相关,当接种浓度为108cfu/mL时,EBS05才能在根、茎内有效定殖,并持续向叶内转移。以菌体浓度为108 cfu/mL的发酵液进行浸种或灌根处理后,EBS05在根内定殖量始终大于同时期茎、叶内的定殖量;菌株在小麦根、茎和叶内的定殖数量均表现为接种初期逐渐增加,至接种后第10-12d达到最大值,随后逐渐降低。2、以小麦纹枯病菌为靶标菌,通过单因素试验和正交设计试验对其发酵条件进行了优化。结果表明,内生细菌EBS05适宜的发酵培养基主要营养成分（的组成和配比分别）为可溶性淀粉3%、蛋白胨2%、NaCl 0.5%。最佳发酵条件为:初始pH 5-9,最适温度34℃,装液量25 mL/250 mL三角瓶,接种量3%,发酵时间72 h。3、EBS05发酵液对禾谷丝核病菌菌丝有明显的抑制作用。发酵液处理禾谷丝核菌菌丝后,细胞内含物增加,细胞间隔膜加厚,部分细胞畸形,分叉明显增多。4、通过盆栽和田间试验测定内生细菌EBS05对小麦纹枯病的防治效果,结果表明EBS05对小麦纹枯病的防治效果优于对照药剂25g/L适乐时悬浮种衣剂,带菌发酵液和除菌发酵液的温室防治效果分别达91.2%和88.2%,大田防治效果分别为66.3%和56.2%。5、采用菌丝生长速率法研究了EBS05和适乐时对小麦纹枯病菌的毒力及联合毒力。结果表明EBS05和适乐时有效活性成分对小麦纹枯病菌都有一定的抑制作用,EC50分别为109.365μg/mL、80.318μg/mL,将两者按照一定比例复配后,EC50为81.845μg/mL,增效比值为SR=1.23,介于0.52.6之间,EBS05活性成分和适乐时混合使用对小麦纹枯菌防效具相加作用,而且防治效果稳定。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 概述
• 1.2 植物内生菌生物学作用
• 1.2.1 内生菌的固氮作用
• 1.2.2 促进植物生长
• 1.2.3 增强宿主植物的抗逆境、抗病虫害等作用
• 1.3 植物内生菌生防机理研究概况
• 1.3.1 产生抗生素类物质及其他抗菌活性物质
• 1.3.2 产生水解酶
• 1.3.3 产生植物生长调节剂促进宿主植物生长
• 1.3.4 与病原菌竞争生态位和营养物质
• 1.3.5 诱导植物产生抗性
• 1.4 植物内生菌在生物防治上的应用
• 1.4.1 内生细菌的开发与应用
• 1.4.2 内生真菌的开发与应用
• 1.5 内生菌防治病害的存在问题及发展前景
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 供试材料
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 EBS05 在小麦上的定殖动态测定
• 3.2.2 培养基的优化
• 3.2.3 EBS05 发酵液的不同稀释度对小麦纹枯病菌生长的影响
• 3.2.4 EBS05 对小麦纹枯病的防治效果
• 3.2.5 EBS05 和适乐时活性成分的联合毒力
• 4 结果与分析
• 4.1 EBS05 在小麦体内定殖动态测定
• 4.1.1 内生细菌EBS05 抗生素标记
• 4.1.2 突变株的稳定性及生物膜形成能力的测定结果
• 4.1.3 双层滤纸法测定EBS05 在小麦根部的定殖能力
• 4.1.4 EBS05 在小麦体内的定殖动态
• 4.1.5 接种浓度对EBS05 在小麦体内定殖的影响
• 4.2 EBS05 培养基的优化
• 4.2.1 发酵培养基的优化
• 4.2.2 摇瓶发酵条件的研究结果
• 4.3 EBS05 发酵液的不同稀释度对小麦纹枯病菌菌丝生长的影响
• 4.4 EBS05 对小麦纹枯病的防治效果
• 4.4.1 内生细菌EBS05 对小麦发芽率的影响
• 4.4.2 盆栽试验结果
• 4.4.3 大田防治试验结果
• 4.5 EBS05 和适乐时活性成分的联合毒力测定
• 4.5.1 EBS05 发酵液活性成分的测定
• 4.5.2 滤纸条测定联合毒力
• 4.5.3 菌丝生长速率法测定联合毒力测定
• 4.5.4 EBS05 活性成分和适乐时的配伍
• 4.5.5 EBS05 活性成分和适乐时对小麦纹枯病室内防效
• 5 结论与讨论
• 5.1 结论
• 5.2 讨论
• 5.2.1 关于内生细菌EBS05 在小麦体内的定殖动态
• 5.2.2 关于内生细菌EBS05 培养条件的优化
• 5.2.3 关于内生细菌EBS05 活性成分和适乐时的联合毒力测定
• 5.2.4 关于内生细菌EBS05 对小麦纹枯病防治上的应用
• 参考文献
• Abstract