夫西地酸与磷霉素对MRSA生物被膜感染联合效应研究

论文摘要

[目的]研究夫西地酸与磷霉素联用对196株MRSA联合抗菌效应。研究夫西地酸与磷霉素联用对体外MRSA生物被膜的作用。研究夫西地酸与磷霉素联用对烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。研究夫西地酸与磷霉素联用对钴60照射后烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。[方法]（1）采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的夫西地酸与磷霉素对196MRSA的最低抑菌浓度,并计算FIC指数、判定联合效应,采用扫描电镜、原子力显微镜观察MRSA的形态。（2）采用改良的组织培养平板法建立体外MRSA BBF模型,银染法及活菌计数法初步鉴定BBF的形成,采用活菌计数法、扫描电镜（SEM）观察测定时间差疗法夫西地酸与磷霉素对体外MRSA BBF的作用（3）建立烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型,通过对大鼠的生命体征、血常规、感染部位BBF菌落计数的测定以及运用扫描电镜观察等方法研究磷霉素与夫西地酸联合对烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。（4）建立60Co照射后免疫力低下烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。通过对大鼠的生命体征、血常规、感染部位BBF菌落计数测定；对大鼠骨髓病理、皮肤病理观察以及对IL-6、CRP测定等评价磷霉素与夫西地酸联用对免疫力低下的MRSA生物被膜感染的大鼠的作用。[结果]（1）夫西地酸与磷霉素联用对196株MRSA药敏实验结果表明：夫西地酸和磷霉素联合应用,FIC指数分布172株为≤0.5,协同百分比为87.76%)；24株表现无关作用（12.24%）；无拮抗作用。表明夫西地酸与磷霉素联用对多数MRSA呈协同作用。（2）银染法快速鉴定浓密的黑染交织分布的物质为BBF的形成；活菌计数法测定硅胶片生物被膜菌落数。建立24h未成熟的生物被膜的模型,连续给药3天；建立7天成熟的生物被膜的模型,连续给药5天后,各个给药组都能减少MRSA体外BBF内活菌数量。夫西地酸联合磷霉素（16/256μg/ml）比单用夫西地酸（16μg/ml）、单用磷霉素（256μg/ml）对MRSA BBF的作用差异有统计学意义（p<0.05）,减少大于100倍,两者联用比单用协同作用。扫描电镜能够观察模型组形成的致密的MRSA BBF,可以看到大片的球状细菌形成菌落堆积在一起,细菌相互粘连聚集度高。夫西地酸与磷霉素联用后未见粘连的小团块聚集状,少量散在的球状MRSA,少量细菌出现变形。夫西地酸与磷霉素联合用药的效果要优于单用药。（3）成功建立烫伤合并MRSA生物被膜感染的大鼠模型。造模7天时,模型组大鼠白细胞、单核细胞、中性粒细胞的值远远高于正常对照组；造模14天时,磷霉素组、夫西地酸与磷霉素联用组大鼠白细胞、单核细胞、中心粒细胞明显低于造模大鼠组。夫西地酸与磷霉素联用组BBF下活菌计数低于磷霉素组100倍,降低了2个数量级的菌落,提示两者联用有协同杀灭MRSA BBF下细菌的作用。扫描电镜下观察烫伤合并MRSA BBF感染大鼠生物被膜为紧密包绕聚集成团,细菌与细菌之间以粘稠的粘液丝相连,细菌表面凹凸不平的模样物质；夫西地酸和磷霉素组扫描电镜观察生物被膜形态,BBF密度低于磷霉素单用组,其中仅有少量变形的细菌。（4）成功建立了钴60照射致免疫功能低下合并烫伤后MRSA生物被膜感染的大鼠模型。大鼠在造模3天时白细胞降到了最低,造模第七天时,大鼠的白细胞低于正常组。夫西地酸与磷霉素联合给药组的BBF下活菌数明显低于磷霉素单用组,差异有统计学意义（p<0.05）,减少大于100倍,两者联用有协同作用。在给药7天后模型组的CRP、IL-6值远远高于其他三组,差异有统计学意义（p<0.05）。夫西地酸与磷霉素联用组大鼠的CRP、IL-6值与正常组接近。造模7天和14天大鼠骨髓腔均有出血,部分细胞造血功能受损。造模7天和14天大鼠皮肤可见大量的中性粒细胞浸润和细菌菌落。磷霉素组中性粒细胞变形,数量减少。夫西地酸与磷霉素联合用药组比磷霉素单用组的皮肤中中性粒细胞浸润明显减少。钴60照射免疫力低下的烫伤大鼠皮肤MRSA生物被膜感染可被夫西地酸和磷霉素联合用药所抑制。[结论]夫西地酸与磷霉素联用对体外MRSA浮游菌主要为协同作用。夫西地酸与磷霉素联合对体外体内MRSA生物被膜均有破坏和抑制作用。夫西地酸与磷霉素联用对免疫力低下大鼠烫伤合并MRSA生物被膜感染有明显的抑制作用。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 夫西地酸与磷霉素对MRSA体外联合抗菌活性研究
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 夫西地酸与磷霉素对MRSA生物被膜体外联合效应
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 夫西地酸与磷霉素对烫伤合并MRSA生物被膜感染大鼠的联合效应
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 第四部分 夫西地酸与磷霉素对钴60照射后烫伤大鼠合并MRSA生物被膜感染的联合效应
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢