基于NF-κB活化的FPRL1药物筛选模型的应用和孤儿型受体FPRL2的探索性研究

论文摘要

甲酰肽受体家族（Formyl peptide receptor family）在抗HIV感染、遗传性淀粉样病变（amyloidogenic disease）和炎症反应中发挥重要的作用。本论文针对甲酰肽样受体1 （Formyl peptide receptor like-1,FPRL1）建立了基于报告基因的高通量药物筛选模型,并应用于药物筛选;同时对甲酰肽样受体2（Formyl peptide receptor like-2,FPRL2）进行了初步的功能性研究。主要结果如下:1、基于FPRL1的高通量药物筛选模型的建立与应用以NF-κB诱导的报告基因表达作为检测FPRL1激活的指标,利用稳定转染FPRL1表达载体和pNF-κB-Luc报告基因的细胞系（HeLa-FPRL1）,对各种实验条件,如血清浓度、接种密度和DMSO浓度等进行优化,使之符合高通量药物筛选的要求。应用该模型对国家新药筛选中心的天然化合物进行了筛选,发现来源于中药瑞香狼毒的样品NPLC0169 （异狼毒素）的活性最高,剂量依赖性最好,其EC50值为3.23μM。应用仅稳定转染pNF-κB-Luc报告基因的细胞（HeLa-NF-κB）进行复筛,发现NPLC0169可直接活化NF-κB,不必通过FPRL1的介导。在未转染任何表达载体的HeLa细胞中,NPLC0169可引起NF-κB的核转位。NPLC0169的两个立体异构体和一个结构衍生物则无类似生物学效应,提示NPLC0169对NF-κB的活化存在立体结构特异性。2、FPRL2的功能性研究将FPRL2基因构建至pcDNA3和pd2EGFP-N1表达载体并建立稳定表达细胞株HEK293-FPRL2和HEK293-FPRL2-EGFP。共聚焦显微镜观察发现,FPRL2-EGFP表达于HEK293-FPRL2-EGFP细胞的表面。高浓度的外源性配体W肽不能引起HEK293-FPRL2细胞的钙流反应,也不能刺激FPRL2-EGFP蛋白使之内吞。该模型的实用性有待进一步的研究。

论文目录

• 缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 一、G 蛋白偶联受体简介
• 二、甲酰肽受体家族简介
• （一） FPR 基因家族的表达
• （二） FPR 家族的已知配体
• （三） FPR 家族的结构与功能
• （四） 细胞生物学反应
• 三、FPR 家族的疾病相关性
• （一） FPRL1 在遗传性淀粉样病变中的作用
• （二） FPRL1 在炎症反应中的作用
• （三） FPRL2 在免疫应答中的作用
• 四、FPRL1和FPRL2作为新药作用靶点的意义
• 参考文献
• 第二章 基于NF-κB 活化的FPRL1 药物筛选模型的应用
• 一、材料与方法
• （一） 材料与仪器
• （二） 方法
• （三） 数据处理
• 二、结果
• （一） 基于NF-κB 活化的FPRL1 高通量药物筛选模型
• （二） 基于FPRL1 的药物筛选
• （三） NPLC0169 的生物活性具有立体结构特异性
• （四） NPLC0169 的药理作用研究
• 三、讨论
• （一） 基于NF-κB 活化通路的药物筛选模型
• （二） NPLC0169 的立体特异性
• （三） NPLC0169 生理活性
• 四、结语
• 参考文献
• 第三章 孤儿型受体FPRL2 的研究
• 一、材料与方法
• 二、结果
• 1、载体的构建
• 2、pcDNA3-FPRL2-myc 表达载体在HEK293 细胞中表达的检测
• 3、HEK293-FPRL2-myc 细胞对W 肽诱导的胞内钙流反应
• 4、HEK293-FPRL2 细胞对W 肽诱导的NF-κB 的活化反应
• 5、pd2EGFP-FPRL2 表达载体在HEK293 细胞中的表达检测
• 6、W肽不能引起HEK293-FPRL2-EGFP 细胞的受体内吞
• 三、讨论
• 参考文献
• 在学期间文章目录.
• 致谢