论文摘要
目的:观察雷公藤红素对体外培养的大鼠视网膜血管内皮细胞（mouse retinal endothelial cells,MREC）的增殖和凋亡及VEGF表达的影响,为视网膜新生血管的药物防治提供新的思路和理论依据。方法:体外原代培养MREC,通过免疫细胞化学方法检测FⅧr-Ag鉴定培养的MREC;使用不同浓度的雷公藤红素作用于原代培养的MREC,分别使用MTT法和流式细胞术观察其对细胞增殖和凋亡的影响,使用免疫细胞化学检测药物作用前后MREC中VEGF的表达,并使用血管抑素150μg/ml做为阳性对照组药物。结果: 1:免疫细胞化学检测体外原代培养的MREC,Ⅷ因子相关抗原抗体染色,呈阳性染色;2:MTT比色法结果显示,用0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.05μg/ml,0.1μg/ml, 0.5μg/ml的雷公藤红素处理MREC培养24h、48h和72h ,雷公藤红素0.02μg/ml以上时,与对照组比较有显著性差异（P<0.05）。作用24h细胞增殖抑制率分别为8.62±4.23%,24.41±6.27%,46.51±5.95%,65.62±9.21%,65.62±9.21%,74.69±11.26%;作用48h细胞增殖抑制率分别为9.34±3.78%、26.21±7.35%、51.36±6.39%、66.59±8.99%、73.19±10.24%、76.16±15.21%;作用72h细胞增殖抑制率分别为11.24±4.62%、32.69±7.21%、55.28±10.25%、70.22±9.34%、75.84±13.69%、78.93±10.76%。随着药物浓度的逐渐提高,作用时间的增加,细胞存活率逐渐下降,而细胞抑制率逐渐升高;3:流式细胞术结果分析显示,当雷公藤红素浓度为0.05μg/ml时,MREC的凋亡率为8.42±1.07%,与空白对照组有差异性（P<0.05）,与对照血管抑素组间无显著差异性（P>0.05）;4:分别用0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.05μg/ml, 0.1μg/ml的雷公藤红素处理MREC培养24h ,行免疫细胞化学实验检测VEGF的表达,对图片用灰度值扫描显示随着药物浓度的增高,VEGF的表达量逐渐减少,雷公藤红素能下调VEGF的表达,也呈剂量依赖关系（p<0.05）。结论:雷公藤红素对体外培养的大鼠视网膜血管内皮细胞的增殖有抑制作用,呈时间和剂量依赖性;并能诱导细胞的凋亡;雷公藤红素抑制视网膜新生血管与下调视网膜血管内皮细胞中VEGF的表达有关。
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