CD4+CD25+调节性T细胞与食管癌转归的关系

论文摘要

肿瘤对人类健康构成极大威胁,肿瘤治疗以手术、化疗、放疗为主。近年来以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术、化疗、放疗治疗肿瘤的新模式。肿瘤的发生、发展与机体的免疫监视机能密切相关。近年来研究发现,人体内有一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群-CD4+CD25+调节性T细胞,可控制外周自身免疫反应,导致机体对肿瘤的免疫耐受。这类细胞具有免疫抑制及免疫无能等特性。CD4+CD25+调节性T细胞在体外发挥免疫抑制作用时没有MHC限制性,一旦被激活,其抑制活性是非特异的,可能通过细胞直接接触,细胞因子分泌等作用机制抑制CD4+和CD8+等T细胞的活化和增殖。课题将通过检测CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌局部及全身的分布状况,进一步分析与临床病理的关系,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌发展及预后中的作用机制,旨在为食管癌的生物治疗提供新的切入点。第一部分食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义研究目的通过检测食管癌患者外周血、肿瘤组织CD4+CD25+调节性T细胞水平的变化,及其与临床病理的关系,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌局部及全身免疫中的作用机制。方法应用流式细胞仪检测食管癌患者外周血、肿瘤组织的CD4+CD25+调节性T细胞比例。37例食管癌患者外周血经淋巴细胞分离液分离单个核细胞;术中无菌切除食管癌组织20例,采用酶消化法分离肿瘤浸润淋巴细胞。经鼠抗人CD3、鼠抗人CD4、鼠抗人CD25抗体标记后应用流式细胞仪分析CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例,比较不同病理类型、不同分期等食管癌患者外周血及肿瘤局部组织的CD4+CD25+调节性T细胞的分布变化。结果1.37例食管癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为（12.31±3.58）%,20例食管癌局部组织CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的比例为（13.81±2.68）%,均显著高于同期健康对照组外周血中CD4+CD25+调节性T细胞所占比例（5.92±1.66）%,差异具有统计学意义（P均＜0.01）。2.37例食管癌患者中鳞癌32例,腺癌5例,两种不同病理类型食管癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞分别为（12.55±3.70）%、（10.76±2.35）%,较正常健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞显著升高（P＜0.01）,但两种病理类型之间差异无统计学意义（P＞0.05）。3.在不同分期的食管癌患者中,4例Ⅰ期、20例Ⅱ期、13例Ⅲ期食管癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例逐渐增高,分别为（11.10±2.56）%、（12.55±3.67）%、（14.32±3.85）%,三组患者CD4+CD25+调节性T细胞比例随分期增高呈上升趋势,经方差分析,三组比例差异显著（P＜0.01）。4.37例食管癌手术患者中,淋巴结转移组外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例为（13.44±3.72）%,淋巴结未转移组CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例为（10.83±2.85）%,两组差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞表达占CD4+T细胞比例在不同年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度间差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论食管癌患者外周血及肿瘤局部组织CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例增高,显著高于同期健康对照组。CD4+CD25+调节性T细胞增高比例与TNM分期、淋巴结是否转移有关。食管癌患者外周血及肿瘤局部CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例均增高,提示食管癌患者全身及肿瘤局部均存在免疫异常。推测CD4+CD25+调节性T细胞可能参与了食管癌的发生与发展。第二部分食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞表达与术后生存率的关系研究目的通过检测CD4+CD25+调节性T细胞特征性标志FOXP3在食管癌肿瘤组织中的表达,分析CD4+CD25+调节性T细胞在食管癌肿瘤组织中的浸润情况,进一步探讨FOXP3的表达情况与食管癌患者术后生存期的关系,间接预测CD4+CD25+调节性T细胞对食管癌患者预后的影响。方法采用免疫组织化学技术测定60例食管癌组织切片的CD4+CD25+调节性T细胞的特异性表面标志—FOXP3的表达,并以Kaplan-Meier法估计FOXP3过表达与非过表达食管癌患者的术后生存率,并绘制出生存率曲线,运用Log-rank检验加以比较。结果1.60例手术切除的食管癌组织中,FOXP3过表达29例,非过表达31例,过表达率为48.33%,FOXP3的过表达率在不同性别、年龄、病理类型、分化程度、肿瘤部位、肿瘤浸润深度间差异无统计学意义（P均＞0.05）。2.CD4+CD25+调节性T细胞的特异性标志FOXP3在肿瘤组织的过表达率与淋巴结转移状态及临床分期有关。淋巴结转移患者与未转移患者FOXP3过表达率分别为67.65%、23.08%,经卡方检验,差异显著（P＜0.01）;不同TNM分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期食管癌患者肿瘤组织FOXP3的过表达率逐渐增高,经Fisher确切概率法检验,X2为14.120,差异显著（P＜0.01）;FOXP3过表达者预后较非过表达者差,5年生存率分别为10.34%,22.58%,经Log-rank检验X2=5.05,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论运用免疫组织化学方法,通过对CD4+CD25+调节性T细胞的特征性标志—FOXP3的检测及其与临床病例资料的分析,初步推测CD4+CD25+调节性T细胞对判断食管癌患者预后有一定的参考价值,但是能否作为判断预后的一个独立的指标还有待进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 论文正文
• 引言
• 1.1 立题依据
• 1.2 研究目的
• [第一部分] 食管癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义
• 1. 前言
• 2. 对象与方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• [第二部分] 食管癌患者CD4十CD25+调节性T细胞表达与生存率的关系
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 综述
• 附图与附表
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 学位论文评阅及答辩情况表