首页> 正文

沙眼衣原体感染诱导炎症机制的研究

2020-11-29阅读(771)

沙眼衣原体感染诱导炎症机制的研究

论文摘要

研究目的沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,C.trachomatis）感染除导致沙眼外,也可以引起性传播疾病,导致宫颈炎、输卵管炎、盆腔炎等,最终可致流产、异位妊娠、不孕等严重后遗症。目前认为C.trachomatis感染引起的炎症反应是其致病的主要原因,但确切机制尚不明确,本课题从①C.trachomatis感染引起IL-1α、IL-6、IL-8等炎症因子产生的分子机制;②IL-1α在C.trachomatis诱导IL-8产生中的作用;以及③caspase-1在宿主抵抗衣原体感染和衣原体导致病理损伤中的作用,三个方面探索C.trachomatis感染诱导炎症的机制。为深入研究C.trachomatis致病机制和机体的抗感染免疫反应提供实验依据。研究方法1.用ELISA、RT-PCR方法检测C.trachomatis感染诱导上皮细胞中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的产生;用免疫荧光技术观察C.trachomatis感染后细胞内IL-8的表达和亚细胞定位。2.用免疫印迹法检测C.trachomatis感染后ERK、P38、JNK三条MAPK信号通路的激活,用化学抑制剂分别抑制三条通路的活化,观察各条通路在C.trachomatis诱导IL-1α、IL-6、IL-8等细胞因子中的作用。3.用IL-1αsiRNA、IL-1α-/-鼠巨噬细胞感染实验以及对IL-1α不同表达能力的细胞系感染实验,观察IL-1α在C.trachomatis诱导IL-8中的作用。4.通过IL-1Ra和IL-1α中和性抗体阻碍IL-1RⅠ受体途径,用IL-1RⅠ-/-鼠巨噬细胞感染实验,观察IL-1α是否通过IL-1RⅠ途径参与C.trachomatis诱导IL-8;并通过免疫荧光观察IL-1α和IL-8亚细胞定位以及真核细胞pDsRed-pro-IL-1α质粒转染实验,进一步明确IL-1α参与C.trachomatis诱导IL-8的机制。5.通过免疫印迹检测C.trachomatis和C.muridarum（小鼠生物型C.trachomatis）感染上皮细胞后caspsase-1的活化;用caspsase-1-/-鼠生殖道感染C.muridarum,制备C.muridarum生殖道感染动物模型,监测感染鼠IFU情况,观察小鼠对C.muridarum初次感染、再次感染的易感性和C.muridarum的清除,以及初次感染、再次感染后小鼠生殖道病理改变。研究结果1.通过ELISA、RT-PCR方法检测发现C.trachomatis感染可诱导上皮细胞产生IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子,呈时间-剂量依赖性;并且IL-1β、IL-6、IL-8在细胞内和细胞外表达改变的情况是一致的,IL-1α则不同,C.trachomatis感染36h后观察到细胞内IL-1α升高,直至感染60h才检测到细胞外IL-1α;用免疫荧光技术观察C.trachomatis感染的细胞内IL-8表达增高,聚集在高尔基体内。2.用免疫印迹法检测到C.trachomatis感染后可以激活MAPK通路中ERK和P38通路,呈时间依赖性,与C.trachomatis感染诱导IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子的产生具有一定的相关性;通过化学抑制剂分别抑制MAPK三条通路,发现P38信号通路参与C.trachomatis诱导IL-1α、IL-6、IL-8,ERK信号通路仅参与C.trachomatis诱导IL-8。3.通过RT-PCR和ELISA方法发现HT29、HGF两株细胞系不表达内源性IL-1α,C.trachomatis感染也不能诱导HT29、HGF产生IL-8;SiHa、Hela229、Hep2细胞系表达内源性IL-1α,C.trachomatis感染诱导其产生IL-8;IL-1αsiRNA和IL-1α-/-鼠巨噬细胞感染实验进一步证实C.trachomatis通过IL-1α诱导IL-8产生。4.通过IL-1Ra和IL-1α中和抗体阻碍IL-1α与IL-1RⅠ结合,发现在C.trachomatis感染48h,阻断IL-1RⅠ受体途径并不影响IL-8产生,C.trachomatis感染72h阻断IL-1RⅠ受体途径可以部分显著地抑制IL-8产生。IL-1RⅠ-/-鼠巨噬细胞C.trachomatis感染实验,显示在C.trachomatis感染48h,IL-1RⅠ-/-鼠巨噬细胞IL-8产生与野生对照鼠无差异。免疫荧光观察发现C.trachomatis刺激细胞内IL-1α进入细胞核,同时诱导IL-8产生;将pDsRed-pro-IL-1α质粒转染Hela229细胞发现,pDsRed-pro-IL-1α可以进入细胞核诱导IL-8产生。5.免疫印迹实验检测到C.trachomatis和C.muridarum感染后可活化caspase-1;将C.muridarum感染caspase-1-/-鼠生殖道,制备C.muridarum生殖道感染动物模型,发现caspase-1不影响小鼠对C.muridarum的易感性,无论初次还再次感染,caspase-1-/-鼠清除C.muridarum能力与对照组相比无显著差别。制备病理切片评估小鼠生殖道炎症程度,显示caspase-1-/-鼠输卵管的炎症损伤在初次感染后较野生对照组显著减轻（p＜0.05）。结论1.活化MAPK/ERK通路参与C.trachomatis诱导炎症因子IL-8的产生,活化MAPK/P38通路参与C.trachomatis诱导炎症因子IL-1α、IL-6、IL-8的产生。2.细胞内IL-1α可以通过一条非IL-1RⅠ依赖途径介导C.trachomatis诱导IL-8产生。3.Caspase-1参与C.muridarum对小鼠上生殖道的病理损伤,而不影响小鼠抵抗C.muridarum感染。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略词简表
  • 前言
  • 第一章 MAPK/ERK和MAPK/P38信号通路的活化参与C.trachomatis诱导的促炎因子的产生
  • 摘要
  • 1.1 材料和方法
  • 1.2 结果
  • 1.3 讨论
  • 第二章 细胞内IL-1a通过非IL-1受体依赖机制介导C.trachomatis诱导IL-8的产生
  • 摘要
  • 2.1 材料和方法
  • 2.2 结果
  • 2.3 讨论
  • 第三章 Caspase 1参与C.muridarum感染导致的生殖道病理损伤
  • 摘要
  • 3.1 材料和方法
  • 3.2 结果
  • 3.3 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要研究成果

    • 相关论文文献

    • [1].重型颅脑损伤血清Caspase-3的水平变化及其意义[J]. 中国临床神经外科杂志 2020(04)
    • [2].细胞焦亡与癫痫[J]. 临床神经病学杂志 2020(02)
    • [3].地塞米松对脂多糖诱导人视网膜色素上皮细胞炎症损伤及NLRP3/Caspase-1通路的影响[J]. 眼科新进展 2020(09)
    • [4].Caspase-1与肿瘤相关性研究进展[J]. 中华中医药学刊 2019(01)
    • [5].牦牛Caspase-3克隆、序列分析与组织表达研究[J]. 西南民族大学学报(自然科学版) 2019(05)
    • [6].肥胖患者炎性单核细胞Caspase活性的研究[J]. 天津医科大学学报 2017(02)
    • [7].血清IL-18、Caspase-3水平与新生儿缺氧缺血性脑病的相关性[J]. 实用临床医药杂志 2016(03)
    • [8].Procaspase-8/Caspase-8非凋亡作用的研究进展[J]. 生命的化学 2016(05)
    • [9].Caspase的非凋亡性作用[J]. 生命的化学 2015(03)
    • [10].日本三角涡虫Caspase-7基因的克隆及功能研究[J]. 四川动物 2019(01)
    • [11].Caspase-1信号通路介导的细胞焦亡在放射性肠炎中的作用[J]. 肿瘤预防与治疗 2019(09)
    • [12].自体垂直悬吊牵引与靶向调控caspase3对兔退变椎间盘细胞的影响[J]. 解放军医学杂志 2017(12)
    • [13].二甲基亚砜对不同器官细胞caspase影响的研究进展[J]. 医学综述 2018(03)
    • [14].Chemotherapy drugs induce pyroptosis through caspase-3-dependent cleavage of GSDME[J]. Science China(Life Sciences) 2018(06)
    • [15].Anti-cancer effect of ethylacetate fraction from Orostachys japonicus on HT-29 human colon cancer cells by induction of apoptosis through caspase-dependent signaling pathway[J]. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2018(05)
    • [16].Caspase-3与肝癌细胞的凋亡研究[J]. 中国医药指南 2018(20)
    • [17].胡黄连苷Ⅱ通过抑制cyto C/caspase-9/caspase-3通路发挥神经保护作用[J]. 中国药理学通报 2017(05)
    • [18].乳腺癌与Bcl-2、Caspase-3的相关性研究与应用[J]. 川北医学院学报 2017(04)
    • [19].木贼有效部位抑制氧化低密度脂蛋白致内皮细胞凋亡及Caspase-3的表达[J]. 云南中医中药杂志 2017(06)
    • [20].丙泊酚对幼鼠认知和Caspase-3表达的影响[J]. 儿科药学杂志 2016(01)
    • [21].Comparison of the effect of intravitreal bevacizumab and intravitreal fasudil on retinal VEGF,TNFα,and caspase 3 levels in an experimental diabetes model[J]. International Journal of Ophthalmology(English Edition) 2014(01)
    • [22].Naofen promotes TNF-α-mediated apoptosis of hepatocytes by activating caspase-3 in lipopolysaccharide-treated rats[J]. World Journal of Gastroenterology 2014(17)
    • [23].p53,bcl-2,caspase-3在老年晚期非小细胞肺癌组织中的表达及对预后的影响[J]. 北京医学 2014(07)
    • [24].Caspase-3抑制剂的筛选体系构建及药物筛选[J]. 南开大学学报(自然科学版) 2014(04)
    • [25].原发性干燥综合征患者唇腺组织中Caspase-3表达研究[J]. 中国实用口腔科杂志 2014(09)
    • [26].Ki-67、Caspase-3在胸腺肿瘤的表达及意义[J]. 长治医学院学报 2014(05)
    • [27].Caspase-3在恶性脑膜瘤组织中的表达及临床意义[J]. 数理医药学杂志 2013(02)
    • [28].Caspase-3蛋白在口腔白斑转化为口腔鳞状细胞癌中的作用[J]. 中国中医药现代远程教育 2013(05)
    • [29].Bcl-2、Caspase-3与阿尔茨海默病关系的研究进展[J]. 临床医学工程 2013(09)
    • [30].尖锐湿疣和鲍温样丘疹病中Livin,Caspase-3的表达及相关性分析[J]. 中国皮肤性病学杂志 2012(02)

    标签：;  ;  

    沙眼衣原体感染诱导炎症机制的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2025 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5